Otsing sellest blogist

UUS!!!

Raku jagunemine: Mitoos

Rakutsükkel Mõned rakud meie kehas ei ole jagunemisvõimelised nagu näiteks mõned närvirakud ja punased vererakud. Enamus rakkudest aga kasva...

kolmapäev, 23. august 2023

Christopher Columbus

Blogi, mis räägib kõigest, mis on Leonhardile oluline ja/või huvitav. Kommenteerige, tellige, lugege, nautige ja õppige.

Christopher Columbuse elulugu

Christopher Columbus (1451–1506) oli Genova navigaator, Hispaania laevastiku komandör, kes saabus 12. Uskudes, et ta oli jõudnud Indiasse teel läände, suri ta teadmata, et ta oli leidnud maa uuelt kontinendilt tänapäeva Kesk-Ameerika piirkonnas.

Christopher Columbus (1451–1506) sündis Genovas, Itaalias, 1451. Tagasihoidliku kangru, Domenico Colombi ja Susana Fontanarossa poeg, oli viie venna esmasündinu.

Ta oli teadlik geograafia, astronoomia ja matemaatika, kuid see on vaieldav, et ta käis Ülikooli Padua. Ta pühendas end disaini ja lugemise raamatuid navigatsiooni, nende hulgas Million,Marco Polo. Koopia, mis kuulus talle, täis märkmeid pankades, võib näha Kolumbia Raamatukogu Sevilla.

Navigaatori karjääri põhimõte

14-aastaselt hakkas ta purjetama kaubalaevadel, mis jooksid piki Liguuria rannikut.

22-aastaselt juhtis ta Napoli trooni teeskleja Renato II D'Anjouri prahitud laeva, mille eesmärk oli kinni püüda Aragoni kuninga Johannes II laev.

1476. aastal saabus ta Portugali. 1477. aastal osales ta Islandil saabunud ekspeditsioonil. 10 aasta jooksul jäi ta Portugali (1476-1485) ta juhtis kaarte ja tegi mitu reisi, üks Genova ja teised piki Aafrika rannikul. Ta hoolitses oluliste genoese firmade huvide eest.

Kuulus ekspeditsioon Indiasse

Pärast leseks saamist otsustab Columbus paluda kuningas John II toetust väljamõeldud ekspeditsioonile Indiasse ja seega ületada aja kaubandusliku monopoli. 1485. aastal lükkas portugallane projekti tagasi. Obstinate, läks proovida oma õnne Hispaanias.

Hispaania Palosi sadama lähedal läks Columbus La Rábida kloostrisse, kus ta jättis oma poja Diego ja sai munkadelt soovituse Medina Celi hertsogile Dom Luís de la Cerdale, kes oli Sevilla laevaomanik.

Kui hertsog konsulteeris kuninganna Elizabethiga, palus ta tal saata projekt Córdoba, kuningriigi koju, millele on lisatud selle autor. Kuningate poolt projekti uurimiseeest süüdistuse andmine kestis paar aastat. Negatiivne vastus tuli 1490.

Aastal 1492, pärast Seda, kui Hispaania vallutas Granada moorid, reis oli taas kaaluda kuninganna Elizabeth. Rahastamine oli mõeldud Hispaania pankuritele.

Osa edu, Columbus palus 10% kasu maa ta avastas. Ta tahtis ka endale ja kõigile järeltulijatele, mereadmirali, Asevalitseja ja uue piirkonna kuberneri tiitliid. Oli 17.

Ameerika avastus

3. augustil 1492 lahkus Columbus Palos de La Frontera sadamast kolme laevaga: Santa Maria, suurem laev ja kaks väiksemat karamelli, Pinta ja Nina. Ta saabus Kanaari saartele ja 6.

12. oktoobril 1492 nähti maad, see oli saar, mida kutsuti San Salvadoriks (nüüd Bahamal). Indiaanlased, kes seal elasid, olid rahulikud.

Ekspeditsioon uuris ka Kirde rannikul Kuuba ja põhjarannikul Hispaniola (tänapäeva Haiti). Hispaanias tervitati navigaatorit pidude ja auavaldustega. Kuupäeva tunti hiljem Ameerika avastusena.

25. septembril 1493 algas teine reis, mis väljus Cadizist, 17 laevaga ja kuueks kuuks. Selle valmistas ette Don João da Fonseca, kelle nimi oli "indiaanlaste äri komissar".

40 päeva pärast märkasid nad saart, mida kutsuti Dominicaks. Columbus tuuritas Väikeste Antillide ja lähenes Hispaniolale. Ta uuris tänapäeva Kuuba lõunarannikut ja avastas Jamaica. Aastal São Domingo, Dominikaani Vabariik, asutas ta Isabela, esimene Euroopa asula maad avastatud.

Christopher Columbus silmitsi veel kaks reisi, üks 1498 ja viimane 1502, ettepaneku taas jõuda Indiasse. Ta märkas praeguse Panama kanali piirkonda, vähem kui 70 km kaugusel Vaiksest ookeanist. Ta ei naasnud Hispaaniasse enne 12.

Läbirääkimiste st, mille ta oli kuningas Fernandoga lahendanud, sai ta ainult palju maad ja piisavat sissetulekut, vastutasuks õigustest loobumise eest, mida ta püüdis tagasi saada.

Ta sai ainult oma poja Diego ametisse, hiljem kuberner Hispaniola Island.

Isiklik elu

Ta abiellus Filipa Perestrello-Muniziga, Braganza kuningliku perekonna sugulasega ja Bartlomeu Perestrello tütrega, navigaator, kes avastas Madeira saare, kus paar kolis 1479.

Järgmisel aastal sündis tema esimene laps Diego. 1483. aastal lesestus ta.

Paar aastat hiljem kohtus ta Hispaania Beatriz Enriquez de Haraña, kellega ta kunagi ei abiellunud, kuid kes andis talle poja, oma tulevase biograaf Fernando.

Christopher Columbus suri Valladolid, Hispaania, mail 20, 1506.

Christopher Columbus[a] (/kə,misonseotud m b ə s / ; [3] Ladina keel: Christophorus Columbus; LiguuriaCristoffa CoromboItaaliaCristoforo ColomboHispaaniakeeles : Cristóbal Colón; 25. august – 31. Tema ekspeditsioonid, mida toetasid Hispaania katoliku monarhid, olid esimesed Euroopa kontaktid Kariibi mereKesk-Ameerikaja Lõuna-Ameerikaga.

Teadlased üldiselt nõus, et Columbus sündis Vabariigi Genova ja rääkis murre liguuria oma esimese keelena. Ta läks noores eas merele ja reisis laialdaselt, nii kaugele põhja kui Briti saared ja nii palju lõunasse kui see, mis on praegu Ghana. Ta abiellus Portugali aadliku Filipa Moniz Perestreloga ja asus Lissabonis mitu aastat, kuid hiljem võttis kastiilia armukese; Tal oli üks poeg iga naisega. Kuigi columbust loeti suures osas geograafias, astronoomias ja ajaloos. Ta sõnastas plaani otsida Lääne merepääsu Ida-Indiasse, lootes kasu saada tulus vürtsikaubandusest. Pärast Columbuse püsivat lobitööd mitmele kuningriigile nõustusid katoliku monarhid kuninganna Isabella I ja kuningas Ferdinand II toetama reisi läände. Columbus lahkus Kastiilia augustis 1492 kolm laeva, ja tegi maale Ameerikas 12 Oktoober (lõpetades perioodi inimeste elukusameerikas nüüd nimetatakse pre-Kolumbia ajastu). Tema maandumiskoht oli saar Bahamal, mida oma põliselanikud olid Guanahani. Columbus hiljem külastas saari nüüd tuntud Kuuba ja Hispaniola, millega koloonia, mis on nüüd Haiti. See oli esimene Euroopa asundus Ameerikas pärast Seda, kui Norra kolooniad alustasid umbes 500 aastat varem. Columbus naasis Castile 1493. Sõna tema reiside varsti levinud kogu Euroopas.

Columbus tegi veel kolm reisi Uude Maailma, uurides Väikesed Antillid 1493, Trinidad ja Põhjarannikul Lõuna-Ameerika 1498 ja idarannikul Kesk-Ameerika 1502. Paljud nimed ta andis geograafilisi omadusi, eriti saared -on endiselt kasutusel. Ta jätkas idaindialaste poole püüdlemist ja see, mil määral ta oli teadlik, et Ameerikad on täiesti eraldi maamass, ei ole kindel. Ta ei ole kunagi selgelt loobunud oma veendumust, et ta oli jõudnud Kaug-Idas ja andis nime indios ("indiaanlased") põlisrahvaste ta kohtas. Koloniaalkubernerina süüdistasid Columbust tema kaasaegsed märkimisväärses julmuses ja ta viidi peagi ametist välja. Columbuse pingeline suhe Kastiilia krooni ja selle määratud koloniaaladministraatoritega Ameerikas viis tema vahistamiseni ja hispanilast väljaviimiseni aastal 1500 ning hiljem pikendas kohtuvaidlusi hüvitiste üle, mida tema ja tema pärijad väitsid, olid neile krooni poolt võlgu. Columbuse ekspeditsioonid avasid sajandeid kestnud uurimise, vallutus- ja koloniseerimise perioodi, aidates luua kaasaegset läänemaailma. Ülekandeid vana maailma ja uue maailma, mis järgnes tema esimene reis on tuntud Columbia vahetada.

Columbus oli laialdaselt austatud sajandeid pärast tema surma, kuid avalikkuse taju on mõranenud viimastel aastakümnetel, kui teadlased pöörama suuremat tähelepanu kahju, mis on toime pandud tema juhtimise, eriti peaaegu hävitamine Hispaniola põlisrahvaste Taíno elanikkonna väärkohtlemise ja Euroopa haiguste, samuti nende orjastamine. Pooldajad Black Legend ajaloo teooria väidavad, et Columbus on ebaõiglaselt joondatud osana laiemast anti-katoliku sentiment. Paljud vaatamisväärsused ja institutsioonid Lääne poolkeral kannavad tema nime, sealhulgas Kolumbia ja Columbia ringkonda.

Varajane elu

Christopher Columbus väravad kloostri Santa María de la Rábida koos oma poja DiegoBenet Mercadé

Nimi Christopher Columbus on anglicisation Ladina Christophorus Columbus. Tema nimi Liguurian on Cristoffa CoromboItaalia Cristoforo Colomboja Hispaania Cristóbal ColónTa sündis 25. [6]Tema isa oli Domenico Colombo,[4] villakangur, kes töötas nii Genovas kui Ka Savonas ja kellel oli ka juustustend, kus noor Christopher töötas abistana. Tema ema oli Susanna Fontanarossa. Tal oli kolm venda–Bartolomeo,Giovanni Pellegrino ja Giacomo (ka Diego),[2] samuti õde Bianchinetta. Tema vend Bartolomeo töötas Vähemalt osa oma täiskasvanueas Lissabonikarograafia töökojas. [8] Euroopa Komisjoni 15.

Columbus ei kirjutanud kunagi oma emakeeles, mis eeldatavasti oli Liguuria genoese sort:tema nimi 1 kuˈɹuŋbu 6. [11]Ühes oma kirjutistest ütles ta, et läks 10-aastaselt merele. 1470. aastal kolis Columbuse perekond Savonasse,kus Domenico võttis üle kõrtsi. Samal aastal oli Christopher Genoese laeval, mis oli palgatud Anjou Rene teenistusse, et toetada tema katset vallutada Napoli kuningriiki. Mõned kaasaegsed autorid on väitnud, et ta ei olnud Genovast, vaid hoopis Hispaania Aragoni piirkonnast[13] või Portugalist. [14] Neid konkureerivaid hüpoteese on tavateadlased üldiselt diskonteerinud. [15][16] Euroopa Komisjoni 15.

1473. aastal alustas Columbus oma õpipoisiõpet äriagendina Genoa tähtsate Centurione, Di Negro ja Spinola perede äriagendina. Hiljem tegi ta väidetavalt reisi Chiosele, Egeuse saarele, mida valitses Genova. 1476. aasta mais osales ta relvastatud konvois, mille Genova saatis väärtuslikku kaupa Vedama Põhja-Euroopasse. Ta ilmselt dokkis Bristol, Inglismaa,[18] ja Galway, Iirimaa. Ta võis 1477. [1][19][20] On teada, et 1477. Columbus asus Lissabonis aastatel 1477–1485. Ta abiellus Filipa Moniz Perestreloga, Porto Santo kuberneri tütre ja Portugali aadlikuga Lombardia päritolu Bartolomeu Perestrelloga. [21] Euroopa Komisjoni 15.

1479 või 1480 sündis tema poeg Diego Columbus. Aastatel 1482–1485 kauples Columbus Lääne-Aafrikarannikul , jõudes Portugali Elmina kaubanduspunkti Guinea rannikul (tänapäeva Ghana). Enne 1484. Ta naasis Portugali, et oma vara ära klaarida ja võtta oma poeg Diego endaga kaasa. 1485. aastal lahkus ta Portugalist Castilla sse, kus ta leidis armukese aastal 1487, 20-aastase orbi Beatriz Enríquez de Arana. On tõenäoline, et Beatriz kohtus Columbusega, kui ta oli Córdobas,paljude genoese kaupmeeste kogunemiskohas ja kus katoliku monarhide kohus oli vahetevahel. Beatriz, vallaline ajal, sünnitas Columbus loomulik poeg Fernando Columbus juulis 1488, nime monarh Aragon. Columbus tundis poisi oma järglasena. Columbus usaldas oma vanema, seadusliku poja Diego, kes hoolitseb Beatrizi eest ja maksab talle pärast tema surma kõrvale pandud pensioni, kuid Diego oli hooletu oma kohustuste täitmisel. [26] Euroopa Komisjoni 15.

Columbuse koopia Marco Polo reisidest,tema käsitsi kirjutatud märkmed ladina keeles, mis on kirjutatud äärealadele

Ambitsioonikas, Columbus lõpuks õppinud ladina, portugalija kastiilia. Ta luges laialdaselt astronoomia, geograafia ja ajalugu, sealhulgas teoste Claudius PtolemamyPierre Cardinal d'Ailly's Imago Mundireiside Marco Polo ja Sir John MandevillePliny looduslooja paavst Pius II's Historia Rerum Ubique Gestarum. Vastavalt ajaloolane Edmund Morgan,

Columbus ei olnud õpetlane mees. Kuid ta uuris neid raamatuid, tegi sadu marginaalseid märke neid ja tuli välja ideid maailma, mis olid iseloomulikult lihtne ja tugev ja mõnikord vale ... [27] Euroopa Komisjoni 15.

Kogu oma elu, Columbus näitas ka suurt huvi Piibli ja Piibli ettekuulutusi, sageli tsiteerides Piibli tekstid tema kirjad ja palgid. Näiteks osa argumendist, mille ta esitas Hispaania katoliku monarhidele, kui ta taotles oma toetust oma kavandatud ekspeditsioonile, et jõuda indiaanlasteni purjetamise teel läände, põhines tema lugesel Esdrasi teise raamatu (Ezra)kohta: vt 2 Esdras 6:42, mida ta võttis, et maa oleks valmistatud kuuest maaosast ühe vee. Oma elu lõpupoole koostas ta prohvetlike kuulutuste raamatu, kus tema karjääri maadeavastajana tõlgendatakse kristliku eschatoloogia ja apokalüptilise sm. valguses. [8] Euroopa Komisjoni 15.

Carol Delaney on väitnud, et Columbus oli aastatuhandete arv ja et need uskumused motiveerisid tema püüdlusi Aasias mitmel viisil. Kolumbus kirjutas sageli kulla otsimisest oma reiside päevikutest ja kirjutab väärismetalli omandamisest "sellises koguses, et suveräänid... kohustub ja valmistub vallutama Püha Sepulcher". [28] Oma neljanda reisi loos kirjutas Columbus, et "Jeruusalemm ja Sioni mägi peavad kristlike käte ga ümber ehitama". On kirjutatud ka seda, et "kõigi inimeste pöördumine kristlikuusu juurde" on Kolumbuse kirjutiste keskne teema, mis on mõne Aastatuhande uskumuse keskne tõekspidamiste keskne teema. [28] Täpsemalt tuvastada oma motivatsiooni, Hamandi kirjutab, et "vabastamine Jeruusalemma moslemi käed" võiks saavutada "kasutades ressursse äsja avastatud maad". [30] Euroopa Komisjoni 15.

Quest Aasia

Taust

Toscanellimõisted Atlandi ookeani geograafiast (näidatud asetatud kaasaegsele kaardile), mis otseselt mõjutasid Columbuse plaane.

Vastavalt Mongol Empire's hegemony üle Aasia (Pax Mongolicavõi Mongol rahu), eurooplased olid pikka aega olnud ohutu maa läbipääsuSilk Road, et Indies (siis tõlgendada umbes nagu kõik Lõuna-ja Ida-Aasias) ja Hiina, mis olid allikad väärtuslikke kaupu nagu vürtsid ja siid. Mis sügisel Konstantinoopoli et Ottomani türklased 1453, maa marsruut Aasiasse suleti Christian kauplejad. [31] Portugali navigaatorid püüdsid leida mereteed Aasiasse.

Aastal 1470, Florentine astronomeer Paolo dal Pozzo Toscanelli soovitas kuningas Afonso V Portugal, et purjetamine lääne üle Atlandi oleks kiirem viis jõuda Spice IslandsCathayja Cipangu kui liinil ümber Aafrika, kuid Afonso lükkas oma ettepaneku. 1480. aastatel tegid Columbuse vennad ettepaneku plaani kohta jõuda Indiasse, purjetades läände üle "Ookeanimere" (Atlandi ookean). 1481. aastaks oli Toscanelli saatnud Columbusele kaardi, mis viitab sellele, et läänepoolne tee Aasiasse on võimalik. Columbuseplaane raskendas Kagu-läbipääsu avamine Aasiasse Bartolomeu Diase poolt 1488. [35] Euroopa Komisjoni 15.

Geograafilised kaalutlused

Peaaegu kõik haritud läänelased olid vähemalt aristoteleseajast saati aru saanud, et Maa on kerakujuline. [36][37] [35]Maa sfäärilist on arvestatud ka Ptollakaoomiatöös, millel keskaegne astronoomia põhines. Christian kirjanikud, kelle teosed selgelt peegeldavad veendumust, et Maa on sfääriline hulka Saint Bede aus oma Reckoning of Time, mis on kirjutatud umbes AD 723. Columbuse ajal olid selestilise navigatsioonitehnikad , mis kasutavad päikese ja tähtede asukohta taevas koos arusaamaga, et Maa on kera, olnud juba ammu astronoomide poolt kasutusel ja meremehed hakkasid neid rakendama. [38] Euroopa Komisjoni 15.

Juba 3. [39][40] 1. Need mõõtmised olid teadlaste seas laialdaselt tuntud, kuid Ptonoomia kasutamine väiksemate, vanamoodsate vahemaade ühikutes viis Columbuse alahindamiseni Maa suuruse seriaaliga umbes kolmandiku võrra. [41] Euroopa Komisjoni 15.

"Columbuse kaart", koostatud c. 1490 Lissaboni bartolomeo ja ChristopherColumbuse töökojas [42]

Alates Pierre d'Ailly's Imago Mundi (1410) Columbus õppinud Alfraganushinnangul, et teatud laiuskraadi (või kraadi pikkuskraadi piki ekvaatorit) ulatus 562-3 Araabia miili (samaväärne 66,2 meremiili miili või 122,6 kilomeetrit), kuid ta ei teadnud, et see oli väljendatud araabia miil, mitte Rooma lühem miil, millega ta oli tuttav. [43] Seetõttu oleks Ta hinnanud, et Maa ümbermõõt on ligikaudu 30 200 kilomeetrit (16 300 nmi) ekvaatorijuures ja 26 200 kilomeetrit (14 100 nmi) 30-ga kraadi põhja (umbes, kus ta purjetas), samas kui õige väärtus on 40075 kilomeetrit (21639 nmi) juures ekvaatori ja 34735 kilomeetrit (18755 nmi) 30 kraadi põhjaMa ei suudauskuda, et sa sedategid.

Lisaks aktsepteeris enamik teadlasi Ptolemaeas prognoosis, et Euraasia ulatus 180° pikkuskraadini, mitte tegeliku 130° ni (Hiina mandriossa) või 150° (Jaapanisse Hispaania laiuskraadil). Columbus uskus omalt poolt veelgi suuremat hinnangut, jättes väiksema osa veest. In d'Ailly's Imago Mundi, Columbus lugeda Marinus of Tyrehinnangul pikisuunaline span Euraasia oli 225°. [44] Teised inimesed on väitnud, et ta järgis Esdras'iavaldust, et "kuus osa [maakerast] on elamiskõlblikud ja seitsmes on veega kaetud." [45] Ta oli teadlik ka Marco Poloväitest, et Jaapan (mida ta nimetas Cipanguks) oli umbes 2414 kilomeetrit (1500 mi) Hiinast idas ("Cathay"),[44] ja ekvaatorile lähemal kui see on. Teda mõjutas Toscanelli idee, et seal olid asustatud saared isegi kaugemal idas kui Jaapan, sealhulgas müütiline Antillia, mis tema arvates ei pruugi olla palju kaugemal läänes kui Assoorid[45] Euroopa Komisjoni 15.

Columbus oleks seega hinnanud, et kanaari saarte läänest Jaapanini ulatuv kaugus on umbes 9800 kilomeetrit (5300 nmi) või 3700 kilomeetrit (2000 nmi), sõltuvalt sellest, millist hinnangut ta euraasia pikisuunalisse vahemikkusse kasutas. Tõsi arv on nüüd teadaolevalt tunduvalt suurem: umbes 20000 kilomeetrit (11000 nmi). [46]15. Enamik Euroopa navigaatoriid järeldas mõistlikult, et läänepoolne reis Euroopast Aasiasse ei ole võimalik. Katoliku monarhid, aga olles lõpetanud kalli sõja Pürenee poolsaarel, olid innukad saada konkurentsieelise teiste Euroopa riikide püüdlustes kaubanduse India. Columbuse projekt, kuigi kaugele tõmmatud, pidas lubadust sellise eelise. Ma ei suudauskuda, et sa sedategid.

Merealased kaalutlused

Kuigi Columbus eksis pikkuskraadide arvu suhtes, mis eraldas Euroopat Kaug-Idast, ja kaugusest, mida iga kraad esindas, oli tal väärtuslikke teadmisi kaubandustuultekohta, mis osutus tema eduka Atlandi ookeani navigatsiooni võtmeks. Oma esimese reisi 1492, vilgas kaubanduse tuuled idast, mida tavaliselt nimetatakse "lihavõtted", liikuma Columbus laevastiku viis nädalat, Kanaari saartelt Bahama. Täpne esimene maa nägemine ja maandumiskoht oli San Salvadorisland[35] Et naasta Hispaaniasse selle valitseva tuule vastu oleks vaja mitu kuud vaevalist purjetamistehnikat, mida nimetatakse peksmiseks,mille jooksul toit ja joogivesi oleksid tõenäoliselt ammendatud.

Selle asemel naasis Columbus koju, järgides kesk-Atlandi kesklaiuskraadidesse kirdes toimunud kurvkaubandustuuli, kus ta suutis püüdawesterlies't,mis lendas ida suunas Lääne-Euroopa rannikule. Seal omakorda tuul kõver lõuna suunas Pürenee poolsaarel. [47][48] Euroopa Komisjoni 100[48]

Ei ole selge, kas Columbus sai tuuled oma purjetamiskogemusest või oli ta neist teistelt kuulnud. Näib, et vastavat atlandi ookeanis reisimise tehnikat on ära kasutanud kõigepealt portugallased, kes nimetasid seda Volta do mar'ks ("merepööre"). Columbuse teadmised Atlandi tuulemustritest olid siiski esimese reisi ajal ebatäiuslikud. Purjetamine otse lääne Kanaari saared ajal orkaani hooajal, liibuvad nn hobune laiuskraadide Kesk-Atlandi, Columbus riskis kas becalmed või sattumist troopiline tsüklon,mis mõlemad, juhuslikult, ta vältida. [45] Euroopa Komisjoni 15.

Rahalise toetuse otsimine reisiks

Columbus pakub oma teenuseid Portugali kuningale; Chodowiecki, 17.

Umbes 1484, Columbus esitas oma plaanid kuningas John II Portugal[49] Ta tegi ettepaneku, et kuningas varustaks kolm vastupidavat laeva ja annaks Columbusele ühe aasta aega Atlandi ookeani purjetada, otsida läänemarsruuti Orientija naasta. Columbus palus ka, et temast saaks "Ookeani suur admiral", mis nimetati kõigi avastatud maade kuberneriks, ja andis 1/10 000 kogu tulust nendest maadest. Kuningas esitas Columbuse ettepaneku oma ekspertidele, kes selle tagasi lükkasid. See oli nende kaalutletud arvamus, et Columbushinnang reisi kaugus 2400 miili (3860 km) oli liiga madal. Kolumbus reisis Portugalist nii Genovasse kui ka Veneetsiasse,kuid ta ei saanud julgustust. Ma ei suudauskuda, et sa sedategid. 1488. aastal pöördus Columbus taas Portugali kohtusse, mille tulemusena kutsus John II teda taas publikujuurde. See kohtumine osutus ka ebaõnnestunud, osaliselt seetõttu, et mitte kaua hiljem Bartolomeu Dias naasis Portugali uudis tema edukas ümardamine Lõuna otsa Aafrika (lähedal Cape of Good Hope). [50] Euroopa Komisjoni 15.

Columbus kuninganna ees,nagu emanuel Gottlieb Leutzeette kujutas, 1843

Columbus otsis audientsi Aragoni monarhid Ferdinand II ja Isabella I Castilla-Lt,kes olid ühinenud mitme kuningriigiga Pürenee poolsaarel abielludes ja valitsesid koos. 1. mail 1486, kui luba on antud, esitas Columbus oma plaanid kuninganna Isabellale, kes omakorda suunas selle komiteele. Pärast palju aega, savants Hispaania, nagu nende kolleegidega Portugalis, vastas, et Columbus oli äärmiselt alahinnatud vahemaa Aasias. Nad kuulutasid idee ebapraktiline ja soovitas oma Royal Highnesses edasi kavandatud ettevõtmise. Et hoida Columbus võtta oma ideid mujal, ja ehk hoida oma võimalusi avatud, katoliku monarhid andis talle toetust, kokku umbes 14000 maravedis aastaks, või umbes aastapalk meremees. 1489. aasta mais saatis kuninganna talle veel 10 000 maravedis'tja samal aastal esitasid monarhid talle kirja, milles tellis kõik linnad nende valdustes, et pakkuda talle tasuta toitu ja majutust. [53] Euroopa Komisjoni 15.

Columbus saatis ka oma venna Bartholomew Inglismaa Henry VII õukonda, et küsida, kas inglise kroon võib tema ekspeditsiooni sponsoreeeekonnale, kuid piraadid vangistasid ta alles 1491. Selleks ajaks oli Columbus taganenud La Rábida Friary'sse,kus Hispaania kroon saatis talle 20 000 maravedis't ostma uusi riideid ja juhiseid, et naasta Hispaania kohtusse uuteks aruteludeks. [55] Euroopa Komisjoni 15.

Leping Hispaania krooniga

Columbuse lipulaev ja Columbuse laevastik. 400. aastapäeva küsimused 1893. (Laevadel.)

Columbus ootas kuningas Ferdinandi laagris, kuni Ferdinand ja Isabella vallutasid Granada, viimase moslemikindluse Pürenee poolsaarel, jaanuaris 1492. Isabella pihtija Hernando de Talaverajuhitud nõukogu leidis Columbuse ettepaneku jõuda indiaanlasteni ebausutavalt. Columbus oli lahkunud Prantsusmaale, kui Ferdinand sekkus,[d] saates talavera ja piiskop Diego Deza esmalt kuninganna poole pöörduma. Isabellat veenis lõpuks kuninga sekretär Luis de Santángel,kes väitis, et Columbus toob oma ideed mujale ja pakkus abi rahastamise korraldamisele. Isabella saatis siis kuningliku valvuri Columbuse ära tooma, kes oli reisinud mitu kilomeetrit Córdoba suunas. [56] Euroopa Komisjoni 15.

Aprillis 1492 "Capitulations of Santa Fe", kuningas Ferdinand ja kuninganna Isabella lubas Columbus, et kui ta õnnestub ta saab auaste admiral Ookeani meri ja määratud Asevalitseja ja kuberner kõik uued maad ta võiks nõuda Hispaania. Tal oli õigus nimetada kolm inimest, kelle lt suveräänid valivad ühe, igale ametile uutel maadel. Tal oleks õigus 10 protsendile uutest maadest saadavatest tuludest igavesti. Lisaks oleks tal võimalus osta üks kaheksas huvi mis tahes äriettevõtte vastu uute maadega ja saada üks kaheksandik kasumist. [45] Euroopa Komisjoni 15.

Columbus arreteeriti hiljem 1500 ja jäeti ametipostidelt. Tema ja tema pojad, Diego ja Fernando, siis läbi pikk rida kohtuasju vastu Kastiilia kroontuntud pleitos colombinos, väites, et Crown oli ebaseaduslikult reneged oma lepingulised kohustused Columbus ja tema pärijad. Columbuse perekonnal oli oma esimeses kohtuvaidluses edu, kuna 1511. Diego jätkas kohtuvaidlusi 1512, mis kestis kuni 1536, ja edasised vaidlused jätkusid kuni 1790. [57] Euroopa Komisjoni 15.

Reisid

Reisid Christopher Columbus (oletus)

Aastatel 1492–1504 sooritas Columbus neli edasi-tagasi reisi Hispaania ja Ameerikavahel, kusjuures iga reisi sponsoreeris Kastiilia kroon. Oma esimesel reisil avastas ta iseseisvalt Ameerika. Need reisid tähistasid Euroopa uurimise ja koloniseerimise algust Ameerikasning on seega olulised nii avastuse ajastule kui ka lääne ajaloole. [8] Euroopa Komisjoni 15.

Columbus nõudis alati, pidades silmas kasvavaid tõendeid vastupidiste tõendite ga, et maad, mida ta nende reiside ajal külastas, olid osa Aasia mandrist, nagu on varem kirjeldanud Marco Polo ja teised Euroopa reisijad. [8] Columbuse keeldumine aktsepteerida, et maad, mida ta oli külastanud ja väitis, et Hispaania ei kuulunud Aasiasse, võivad osaliselt selgitada, miks Ameerika kontinent sai nime Florentine explorer Amerigo Vespucci järgi, mitte Columbuse järgi. [58][e] [e] [58] [e] [e] [58

Esimene reis (1492–1493)

Esimene reis (oletus). [f] Modern kohanimed must, Columbuse kohanimed sinine

3. augusti 1492. Suurim oli carrackSanta María, omab ja kapten Juan de la Cosaja all Columbus otsese juhtimise all. Ülejäänud kaks olid väiksemad karahvinid,hüüdnimega Pinta ("värvitud") ja Niña ("tüdruk"),[63] mida juhtisid vastavalt Pinzóni vennad (vastavaltMartín Alonso ja Vicente Yáñez). Kolumbus purjetas esimest korda Kanaari saartele, mille castile oli suures osas vallutanud. Ta restocked eraldised ja tegi remonti seejärel lahkus San Sebastián de La Gomera 6 September,[64] mis osutus viienädalane reis üle ookeani.

13. septembril 1492 täheldas Columbus, et tema kompassi nõel ei osutanud enam North Starile. Kunagi arvati, et Columbus oli avastanud magnetdeklinatsiooni, kuid hiljem näidati, et see nähtus oli juba teada nii Euroopas kui ka Hiinas. [65][g] [65] [g] [65] [65] [

7. oktoobril märkas meeskond "[i] mmenselinnukarja". 11. oktoobril muutis Columbus laevastiku kursi läände ja sõitis läbi öö, uskudes, et maa on peagi leitud. Kell 10:00 õhtul ta arvas, et ta nägi valgust "nagu väike vaha kabiin tõuseb ja langeb". [68]Neli tundi hiljem, valvel PintaRodrigo de Triana, täpiliste maa, ja kohe hoiatas ülejäänud meeskonna karjuda. Seejärel kinnitas Pintakapten Martín Alonso Pinzón maa nägemist ja hoiatas Columbust, tulistades lombardi. HiljemväitisColumbus, et ta oli juba paar tundi varem maad valgust näinud, nõudes sellega endale eluaegset pensioni, mida Ferdinand ja Isabella lubasid esimesele inimesele, kes maad nägi. [35][71] Columbus kutsus seda saart (mis on praegu Bahama) San Salvador (mis tähendab "Püha Päästja"); pärismaalased kutsusid seda Guanahaniks. [72][i] Columbus kirjutas põlisrahvaste ta esimest korda kokku puutunud oma päevikusse kanne 12 Oktoober 1492:

Paljudel meestel, keda ma olen näinud, on armid nende kehadel, ja kui ma tegin neile märke, et teada saada, kuidas see juhtus, näitasid nad, et inimesed teistest lähedal asuvatest saartest tulevad San Salvadori neid kinni püüdma; nad kaitsevad end parimaga, mida suudavad. Ma usun, et inimesed mandrilt tulevad siia, et võtta neid orjadena. Nad peaksid tegema häid ja oskuslikke teenijaid, sest nad kordavad väga kiiresti kõike, mida me neile ütleme. Ma arvan, et neid saab väga kergesti teha kristlased, sest nad tunduvad ei ole religiooni. Kui see rahuldab meie Issandat, siis ma viin kuus neist teie kõrgeaususte juurde, kui ma lahkun, et nad saaksid õppida meie keelt. [74] Euroopa Komisjoni 15.

Columbuse maandumine (12. oktoober 1492), John Vanderlyni maal

Columbus kutsus elanikud maad, et ta külastas indios (hispaania keeles "indiaanlased"). [75][76] [77]Esialgu kohtas ta Lucayani, Taínoja Arawaki rahvaid. Märkides oma kuld kõrva kaunistused, Columbus võttis mõned Arawaks vangi ja nõudis, et nad suunavad teda allikas kulda. [78] Columbus märkis, et nende primitiivsed relvad ja sõjaline taktika tegi põliselanikud vastuvõtlikud lihtne vallutus, kirjutades: "Need inimesed on väga lihtne sõja-like küsimustes ... Ma võiksin vallutada kõik neist 50 mehega ja valitseda neid nii, nagu ma tahan." [79] Euroopa Parlamendi ja nõukogu 15.

Columbus uuris ka Kuubakirderannikut, kus ta maandus 28. 22. novembril võttis Martín Alonso Pinzón Pinta volitamata ekspeditsioonile, otsides saart nimega "Babeque" või "Baneque", mis pärismaalased olid talle öelnud, et tal on kullarikas. Columbus jätkas omalt poolt Hispaniolapõhjarannikule, kus ta maandus 5. Seal jooksis Santa María 1492. Vrakk i kasutati sihtmärk kahur tulekahju muljet pärismaised rahvad. Kolumbuse sai vastu kohalik cacique Guacanagari,kes andis talle loa mõned oma mehed maha jätta. Columbus jättis 39 meest, sealhulgas tõlk Luis de Torres,[81][j] ja asutas asula La Navidad, tänapäeva HaitiColumbus võttis rohkem põliselanikke vangi ja jätkas uurimist. [78] Ta jätkas purjetamist Hispaniola põhjarannikul ühe laevaga, kuni ta kohtas Pinzóni ja Pintat 6.

Christopher Columbuse tagasitulek, tema publik kuningas Ferdinandi ja kuninganna Isabellaees, Eugène Delacroix'i maal

13. jaanuaril 1493 tegi Columbus oma viimase peatuse sellest reisist Uues Maailmas, Rincóni lahes Samaná poolsaare idaosas Hispaniolas. Seal kohtas ta sõjakaid Ciguaoone,ainukesi põliselanikke, kes pakkusid vägivaldset vastupanu oma esimesel reisil Ameerikasse. [84] Ciguaoos keeldus kauplemast vibude ja nooltega, mida Columbus soovis. järgnevas kokkupõrkes pussitati üks Ciguayo tuharad ja teine haavatud noolega tema rinnus. Nende sündmuste tõttu nimetas Columbus noolelahte sisselaskeavaks. [86] Euroopa Komisjoni 15.

Columbus suundus Hispaaniasse Niña,kuid torm eraldas ta Pintast ja sundis Niñat peatuma Santa Maria saarel Assooridel. Pool tema meeskonnast läks kaldale, et palvetada kabelis, et tänada tormi üleelamist. Aga palvetades, nad vangistati kuberner saare, näiliselt kahtlustatakse on piraadid. Pärast kahepäevast standoff, vangid vabastati, ja Columbus jälle seatud purjetada Hispaaniasse. [87] Euroopa Komisjoni 15.

Veel üks torm sundis teda Lissabonisadamasse. 4. märtsil 1493 ankurdas ta Kuninga sadama patrulllaeva kõrval Portugalis. Seal intervjueeris teda Bartolomeu Dias,kes oli paar aastat varem, aastatel 1488–1489 good hope'i neeme ümardanud. Diase edu oli raskendanud Columbuse püüdlusi tagada rahastamine Portugali kohtult, sest kindel tee Indiasse, mida Dias teerajajategi, muutis riskantse, oletusliku läänesuuna tarbetuks. [35] Kui Kolumbas Ei leinud Lissabonis Portugali kuningas John II, kirjutas Columbus talle kirja ja ootas Johannese vastust. John palus Columbusel minna Vale do Paraísosse Lissabonipõhja, et temaga kohtuda. Portugali ja Castilla vahelised suhted olid sel ajal kehvad. Columbus läks Kohtuma Johniga Vale do Paraísos. Kuuldes Columbuse reisi, John ütles talle, et ta uskus, et reis on vastuolus 1479 lepingu Alcáçovas.

Pärast kulutuste rohkem kui nädal Portugalis, ja pöörates oma austust Eleanor Viseu, Columbus jälle purjetada Hispaaniasse. Ferdinand Magellan oli noor poiss ja Eleanori õukonna hoolealune. On tõenäoline, et ta nägi Columbust selle visiidi ajal. 15. märtsil 1493. Sõna tema reisist levis kiiresti üle Kogu Euroopa. Enamik inimesi esialgu uskus, et ta oli jõudnud Aasiasse. [88] Seeria paavsti tellimusi pani aluse sellele, kuidas Hispaania ja Portugal jagaksid äsja uuritud maade saagi. [89] Euroopa Parlamendi ja nõukogu 15.

Teine reis (1493–1496)

Columbuse teine reis

Columbus lahkus 24. Reisijate hulka kuulusid preestrid, talunikud ja sõdurid, kellest oleksid uued kolonistid. See peegeldas uut poliitikat luua mitte ainult "kolooniad ekspluateerimise", vaid ka "kolooniad lahendamise", kust käivitada missioone pühendatud konverteeriva põliselanikud kristlus. [90] Kaasaegsed uuringud näitavad, et "meeskonnaliikmed võisid lisada tasuta mustad aafriklased, kes saabusid Uude Maailma umbes kümme aastat enne orjakaubanduse algust". [91] Euroopa Parlamendi ja nõukogu 15.

Nagu esimesel reisil, peatus laevastik Kanaari saartel, kust ta lahkus 13. 3. novembril nägi Columbus karmsaar, et ta nimetas Dominica (ladina pühapäeval); hiljem sel päeval, ta maandus Marie-Galante, mis ta nimega Santa María la Galante. Pärast purjetamist mööda Les Saintes (Los Santos, "Saints"), jõudis ta saarele Guadeloupe, mis ta nimega Santa María de Guadalupe de Extremadurapärast pildi Virgin Mary austatud Hispaania kloostri VilluercasGuadalupe, Cáceres, Hispaania. Ta uuris seda saart 4.-10.

Michele da Cuneo, Columbuslapsepõlve sõber Savona, sõitis Columbus teise reisi ajal ja kirjutas: "Minu arvates, kuna Genova oli Genova, ei ole kunagi sündinud mees nii hästi varustatud ja ekspert kunsti navigatsiooni nagu ütles admiral." Kolumbus nimetas väikese saare"Saona ... austada Michele da Cuneot, tema sõpra Savonast." Pedro de las Casas, preestri Bartolomé de las Casasisa, saatis columbust ka sellel reisil. [94] Euroopa Parlamendi ja nõukogu 15.

José María Obregóni poolt Christopher Columbuse inspiratsioon , 1856

Arutletakse Columbuse reisi täpset kulgu läbi Mõnepoolsete Antillide, kuid tundub tõenäoline, et ta pööras põhja, nägi ja nimetas mitut saart, sealhulgas:

Columbus nägi ka Neitsisaarte ketti,mille ta nimetas Islas de Santa Úrsula y las Once Mil Vírgenesiks, "Saint Ursula saared ja 11 000 neitsit" (lühendatud nii ajakaartidel kui ka ühisel parlance'il Islas Vírgenes'ile). Ta nimetas ka Neitsi Gorda ("Fat Virgin"), Tortolaja PeterI saare (San Pedro) saared.

Üks esimesi kokkupõrkeid indiaanlaste ja eurooplaste vahel alates viikingite toimumisajast 14. Vähemalt üks eurooplane sai surmavalt haavata ja kõik kanuu elanikud tapeti või võeti kinni. Michele da Cuneo, kes osales lahingus, teatas, et Columbus lasi tal hoida üks vangistatud naised, keda ta peksid ja vägistas. [96][k]Columbus jätkas Neitsisaarteleja maandus Puerto Ricos,mille ta nimetas San Juan Bautistaks[99] Ristija Johannese auks (nimi, mis anti hiljem pealinna San Juanilinnale). Siin, 19. Naised selgitasid, et kõik meessoost vangid söödi ja et nende oma isased järglased olid kastreeritud ja tehtud teenima caribs kuni nad olid piisavalt vanad, et pidada hea süüa. Eurooplased päästsid kolm neist poistest. [100] Euroopa Komisjoni 100, 100

22. novembril naasis Columbus Hispaniolasse, kus ta kavatses külastada La Navidadi fort'i. Columbus leidis kindluse varemetest, hävitatud Taínose poolt. Varemete hulgas olid 11 hispaanlase laibad, kes olid jäänud maha esimese kolonistina Uues Maailmas. Columbus sõitis seejärel üle 100 kilomeetri (62 miili) itta piki Hispaniola põhjarannikut, luues uue asula, mida ta nimetas La Isabelakstänapäeva Dominikaani Vabariigis. [102] La Isabela osutus siiski halvasti asuma ja asula oli lühiajaline.

Orjus, asunikud ja austusavaldus

1494. aastal saatis Columbus Cibaole (kus kuld aina kaevandati),[103] mille tulemusena haaras Ojeda mitu põliselanikku varguse süüdistuses. Ojeda lõikas ühe emakeelega kõrvad ära ja saatis teised La Isabelasse ahelates, kus Columbus käskis neil pea maha raiuda. [104] Oma lühikese valitsemisaja jooksul hukkas Columbus Hispaania kolonistid väiksemate kuritegude eest ja kasutas tükeldamist teise karistusena. [105] 1494. [106][107] Emakeelena Nahuatli konto kujutas ülespanugakaasnenud sotsiaalset lagunemist: "Suur paljud surid selle katk, ja paljud teised surid nälga. Nad ei saanud üles toitu otsima ja kõik teised olid liiga haiged, et nende eest hoolitseda, nii et nad nälgisid oma voodites surnuks." [108] Euroopa Komisjoni 108.

1494. aastaks oli Columbus jaganud oma asevalitsejat ühe oma sõjaväeohvitseriga nimega Margarit, andes talle käsu eelistada põliselanike kristlusele, kuid see osa nende ninast ja kõrvadest tuleks varastada. Margarini mehed kasutasid põliselanikke ära, pekstes, vägistades ja orjastades neid, kusjuures hispanilalast ei ole veel kaks aastat ristitud. Columbuse vend Diego hoiatas Margarititi, et ta järgiks admirali käske, mis ajendas teda kolm karamelli Hispaaniasse tagasi viima. Fray Buil, kes pidi tegema ristimisi, saatis Margarititi. Pärast hispaaniasse saabumist 1494. Margariidi sõdurid, kes jäid läände, jätkasid põliselanike brutseerimist. Selle asemel, et seda keelata, osales Columbus põlisrahvaste orjastamises. 1495. aasta veebruaris võttis ta üle 1500 Arawaksi, kellest mõned olid mässanud kolonistide rõhumise vastu,[78][110] ja kellest paljud vabastati hiljem või võtsid karabsid. Sel kuul saatis Columbus umbes 500 ameeriklast Hispaaniasse, et müüa neid orjadena; umbes 40% suri teel,[78][110] ja pooled ülejäänud olid saabumisel haiged. Selle aasta juunis saatis Hispaania kroon hispaniola kolooniasse laevu ja tarneid, mida Florentine kaupmees Gianotto Berardi aitas hankida. Oktoobris sai Berardi peaaegu 40 000 maravedis'e väärtuses orje, kes väidetavalt olid kas inimsööjad või vangid. [m] (10)

Hispaniola põliselanikud alistusid süstemaatiliselt encomienda süsteemi kaudu, mida Columbus rakendas. [114] Hispaaniast kohandatud, see sarnanes keskaja Euroopa feodaalse süsteemiga, kuna see põhines isandal, kes pakub "kaitset" inimestele, kes võlgnevad tööjõule. Lisaks hakkasid Columbuse reegli alusel Hispaania kolonistid ostma ja müüma põliselanikke orjadena, sealhulgas lastena. Columbuse sunniviisilise töösüsteemi kirjeldas tema poeg Ferdinand: "Cibaos, kus olid kullakaevandused, pidi iga 14-aastane või ülespoole neis inimene maksma suure kulli kullatolmukella; Kõik teised pidid maksma 25 naela puuvilla. Kui indiaanlane oma austusavalduse esitas, pidi ta saama vask- või vaskmärgi, mida ta peab kandma umbes kaela kohta tõendina selle kohta, et ta oli tasu maksnud; iga indiaanlast, kes leiti ilma sellise märgita, tuleb karistada." [103] Monarhid, kes soovitasid märke, nõudsid kerget karistust,[117] kuid iga indiaanlane, kes leiti ilma vasemärgita, olid oma käed ära lõigatud, mis oli tõenäoline surmaotsus. Kuna saarel ei olnud kulla küllust, ei olnud põliselanikel mingit võimalust täita Columbuse kvooti ja tuhanded on sooritanud enesetapu. [119][o] [o] [119] [o] [119] [o

Columbus haigestus 1495. Väed läksid metsikuks, varastasid, tapsid, vägistasid ja piinasid põliselanikke, püüdes sundida neid avaldama kujutletavate kullaaaremajade asukoha." Las Casase sõnul hukkus sel perioodil 50 000 põliselanikku (kuigi nüüdisaegsed ajaloolased on tema kontot kritiseerinud, kuna puudub objektiivsus ja tema rahvastikuhinnangud on sageli tagasi lükatud). [122] Pärast toibumist korraldas Columbus oma vägede pingutused, moodustades eskadrilli mitmesaja raskelt relvastatud mehest ja rohkem kui kahekümnest ründekoerast. Kolumbuse mehed ja koerad jahtisid ja tapsid põgenenud põliselanikke, samuti tuhandeid, kes olid haiged ja relvastamata. [123] Las Casas jutustab, et nende vangide käed lõigatakse ära ja jäetakse "tolgendamine nahatükiga" hoiatuseks nende hõimule; lisaks, sõdurid paigutatud kihlveod nende võimet kasutada oma mõõga peamaha raiumine neid või lõigata neid pooleks ühe löögi. Arawakid püüdsid kolumbuse meeste vastu võidelda, kuid neil puudus rüü, relvad, mõõgad ja hobused. Vangina võetunes pooti nad üles või põletati surnuks. Bartolomé de Las Casase sõnul riputati põliselanikud kolmeteistkümnest rühmast "meie Lunastaja ja Tema kaheteistkümne apostlimälestuseks". Kui Hispaniola põliselanikud hakkasid vastu võitlema oma rõhujate vastu, vallutasid Columbuse mehed ühe reidiga 1500 Arawaki meest, naist ja last. Tugevaim 500 saadeti Hispaaniasse orjadena müümiseks, neist 40% on teel. [78][110] [110] [110] [110]

Kolmas reis (1498–1500)

Kolmas reis

Kolmanda reisi peamine eesmärk oli kontrollida mandri olemasolu, mida Portugali kuningas John II soovitas, et see asus Cabo Verdestedelas. 30. mail 1498 lahkus Columbus kuue laevaga Sanlúcarist, Hispaaniast,oma kolmandaks reisiks Uude Maailma. Kolm laeva suundusid otse Hispaniolasse väga vajalike varudega, samas kui Columbus võttis ülejäänud kolm uurimist, mis võiks leksida Kariibi mere saarte lõunaosas, mida ta oli juba külastanud, sealhulgas loodetud läbipääsu Mandri-Aasiasse. Columbus juhtis oma laevastiku Portugali saarele Porto Santosse,tema naise kodumaale. Seejärel sõitis ta Madeirale ja veetis seal mõnda aega, enne kui sõitis Kanaari saartele ja Cabo Verdesse.

Pärast seda, kui Columbuse laevastik oli mitu päeva Keset Atlandi ookeani doldrums'is rahus olnud, taastus ta tuul ja pööras dominica suunas põhja. Mehed nägiid Trinidadi maad 31. [127] Laevastik sõitis mööda lõunarannikut ja sisenes Dragon's Mouthi,ankurdades Soldado Kalju lähedal (Icacos Pointistläänes, Trinidadi edelapunktist läänes), kus nad puutusid kokku amerindians'i rühmaga kanuutega. 1. augustil saabusid Columbus ja tema mehed lõuna-Ameerika Orinoco jõe suude lähedale. Columbus tunnistas, et see peab olema mandri mandril, kuid siiski uskus, et see on Aasia. Kuigi ta ei läinud kaldale sel ajal, üks tema meestest istutatud Hispaania lipu seal. 2. augustil maandusid Columbus ja tema mehed Icacos Pointis. [130] 4.–12. 5. augustil maandusid nad Lõuna-Ameerika mandril Paria poolsaarel. Seejärel purjetas Columbus Chacachacare'i ja Margarita saartele (jõudis viimaseni 14. augustil),[132] ja nägi Tobagot ja Grenadat. [133] Euroopa Komisjoni 133.

Halva tervise juures naasis Columbus Hispaniolasse 19. Mitmed tagasipöörduvad asunikud ja meremehed lobitööd vastu Columbus Hispaania kohus,süüdistades teda ja tema vennad raske väärjuhtimine. Columbus poos osa oma meeskonnast sõnakuulmatuse eest üles. Tal oli majanduslik huvi Hispaniola põliselanike orjastamise vastu ja sel põhjusel ei olnud ta innukas neid ristima, mis äratas mõnede kirikumeeste kriitikat. [134] 1498.

Türannia süüdistused

1499. aasta oktoobris saatis Columbus Hispaaniasse kaks laeva, paludes Hispaania Kohtul nimetada ametisse kuninglik volinik, kes aitaks tal valitseda. [136] Selleks ajaks olid kohtusse jõudnud ka Columbuse türannia ja ebakompetentsuse süüdistused. 1500. aastal lasi kroon ta kubernerina eemaldada, arreteerida ja transportida kettides Hispaaniasse. [137] Suveräänid asendasid ta Calatrava orduliikme Francisco de Bobadillaga. Bobadillale oli ka kohus teinud ülesandeks uurida Columbuse vastu esitatud jõhkrusid. Saabudes Santo Domingosse, kui Columbus oli ära oma kolmanda reisi uurimise ajal, esitati Bobadillale kohe kaebused kõigi kolme Columbuse venna: Christopheri, Bartolomeo ja Diego kohta. Bobadilla teatas Hispaaniale, et Columbus kasutas hispaniola valitsemiseks regulaarselt piinamist ja moonutamist. [q] [q] [q] [q

Raporti kohaselt karistas Columbus kord meest, kes mõisteti süüdi maisi varguses, kui ta kõrvad ja nina ära lõikasid ja seejärel orjusesse müües. Raportis kirjas olev tunnistus ütles, et Columbus õnnitles oma venda Bartolomeot "perekonna kaitsmise" puhul, kui viimane tellis naise paljalt läbi tänavate ja lasi seejärel oma keele välja lõigata, väites, et Columbus oli madalas sünnis. [139] Dokumendis kirjeldatakse ka seda, kuidas Columbus pani maha kohalikke rahutusi ja mässu: ta tellis kõigepealt jõhkra mahasurumise, kus tapeti paljud põliselanikud, ja seejärel paraded oma tükeldatud kehad läbi tänavate, püüdes takistada edasist mässu. [140] Euroopa Komisjoni 140, 14.

1500. aasta oktoobri alguses esitlesid Columbus ja Diego end Bobadillale ja pandi kolumbuse enda laeva La Gordapardale ahelatesse. Nad saadeti Tagasi Hispaaniasse ja jäid vangi kuus nädalat, enne kui kuningas Ferdinand nende vabastamise tellis. Varsti pärast seda kutsusid kuningas ja kuninganna Columbuse vennad Granadaalhambra paleesse. Seal kuulis kuninglik paar vendade palveid; taastanud oma vabaduse ja rikkuse; Ja pärast palju veenmist nõustus ta rahastama Columbuse neljandat reisi. Aga uks oli kindlalt kinni Columbuse rollist kubernerina. Edaspidi pidi Nicolás de Ovando y Cáceres olema Lääne-Indiauus kuberner . [137] Euroopa Komisjoni 137.

Neljas reis (1502–1504)

Columbuse neljas reis
Vapp antud Christopher Columbus ja House of Colon poolt paavst Alexander VI motu proprio 1502

Columbus tegi nominaalselt neljanda reisi, otsides Melaka väina India ookeani. [142] Koos oma venna Bartolomeo ja tema 13-aastase poja Fernandoga lahkus ta Cádizist 11. Ta sõitis Arzila maroko rannikul päästa Portugali sõdurid, keda ta oli kuulnud olid piiramisrõngas rabad.

15. juunil maandusid nad Martinique'i saarel(Martinica) Carbetis. Orkaan oli õlle, nii et ta jätkas, lootes leida peavarju Hispaniola. Ta saabus Santo Domingosse 29. Selle asemel, kui Columbuse laevad olid Rio Jaina suudmes kaitstud, purjetasid esimesed Hispaania aardelaevastikud orkaani. Columbuse laevad elasid üle vaid väikeste kahjustustega, samas kui 29 laeva 30-st kuberneri laevastikus kadusid tormini 1. Lisaks laevadele anti merre 500 elu (sealhulgas Francisco de Bobadilla oma) ja tohutu kullalast. [143] Euroopa Komisjoni 14.

Pärast lühikest peatust Jamaica, Columbus sõitis Kesk-Ameerikas, saabuvad Guanaja (Isla de Pinos) bay saared ranniku lähedal Honduras 30 juulil. Siin Bartolomeo leitud emakeelena kaupmehed ja suur kanuu, mida kirjeldati kui "nii kaua kui kambüüsi" ja täis lasti. 14. augustil maandus ta Mandri-Ameerika mandril Puerto Castillas,Trujillo lähedal Hondurases. Ta veetis kaks kuud uurides rannikud Honduras, Nicaraguaja Costa Rica, enne saabumist Almirante Bay Panama 16 Oktoober. 1502. aasta detsembri alguses kannatas Columbus ja tema meeskond tugeva tormi. [144] Euroopa Komisjoni 144.

Columbus autab Jamaica põliselanikke, ennustades 1504.

Panamas õppis Columbus Ngobe'st kulda ja väinast teise ookeani, kuid kohalik juht Quibían ütles, et ta ei läheks mööda teatud punkti mööda jõge. Pärast palju uurimist, jaanuaris 1503, asutas ta garnisoni Beléni jõesuudmes. 6. aprillil jäi üks laevadest jõkke. Samal ajal ründas Garisonit Quibían ja teised laevad said kahjustada. Laevaussid kahjustasid ka laevu troopilistes vetes. [145] Euroopa Komisjoni 14.

Columbus lahkus Hispaniolasse 16. 10. mail nägi ta Kaimanisaari,nimetades neid"Las Tortugas"arvukate merikilpkonnade järgi. [146] Tema laevad said kuubaranniku lähedal tormis rohkem kahjustusi. 25. juunil 1503 randusid nad St. Anni lahes Jamaical. [147] Euroopa Komisjoni 147.

Columbus ja tema mehed jäid üheks aastaks Jamaicale lõksu. Hispaanlane, Diego Méndez ja mõned pärismaalased sõudsid kanuuga, et hispaniolalt abi saada. Kuberner Nicolás de Ovando y Cáceresjälestas Columbust ja takistas kõiki jõupingutusi tema ja tema meeste päästmiseks. Vahepeal Columbus, meeleheitliku jõupingutusi, et ajendada põliselanikud jätkata provoneerimine tema ja tema näljane mehed, võitis oma kasuks ennustades Lunar Eclipse 29 Veebruar 1504, kasutades Abraham Zacutoastronoomiline graafikuid. [148][149][150] Abi jõudis lõpuks, ei tänu kubernerile, 29.

Hilisem elu, haigus ja surm

Santa María, Columbuse lipulaeva koopia oma esimese reisi ajal Valladolidi majas[151]

Columbus oli alati väitnud, et mitteusklike pöördumine on üks põhjus oma uurimiseks, kuid ta muutus hilisematel aastatel üha usklikumaks. Tõenäoliselt abiga tema poeg Diego ja tema sõber Carthusian munk Gaspar Gorricio, Columbus toodetud kaks raamatut oma hilisematel aastatel: Book of Privileges (1502), üksikasjalikult ja dokumenteerimine hüved Hispaania Crown, millele ta uskus, et tema ja tema pärijad olid õigus, ja Book of Prophecies (1505), kus ta pidas oma saavutusi explorer, kuid täitmise Piibli ettekuulutuse kontekstis Christian eschat. [8][152] Euroopa Komisjoni 152.

Oma hilisematel aastatel columbus nõudis, et Hispaania Crown anda talle 10 protsenti kogu kasumist, mis on teenitud uutel maadel, nagu on sätestatud Santa Fe capitulations. Kuna ta oli vabastatud oma kohustustest kubernerina, ei tundnud kroon end selle lepinguga seotuna ja tema nõudmised lükati tagasi. Pärast tema surma kaebasid tema pärijad krooni kohtusse osa eest, mis oli saadud kaubavahetusest Ameerikaga, samuti teiste hüvede eest. See tõi kaasa pikaleveninud õigusvaidluste seeria, mida nimetatakse pleitos colombinos 'iks ("Kolumbia kohtuasjad").

Ajal vägivaldne torm tema esimene tagasisõit, Columbus, siis 41, kannatas rünnak, mida arvati ajal podagra. Järgnevatel aastatel, ta oli vaevanud, mida arvati olevat gripp ja muud palavikud, verejooks silmadest, ajutine pimedus ja pikaajaline rünnakud podagra. Rünnakud suurenesid kestuse lt ja raskusastmelt, jättes mõnikord Columbuse voodist kuude kaupa magama ja kulmineerus tema surmaga 14 aastat hiljem.

Tuginedes Columbuselustiilile ja kirjeldatud sümptomitele, kahtlustavad kaasaegsed arstid, et ta kannatas reaktiivse artriidiall, mitte podagra all. [154][155] Reaktiivne artriit on liigesepõletik, mida põhjustavad soolebakteriaalsed infektsioonid või pärast teatud sugulisel teel levivate haiguste (peamiselt klamüüdia või gonorröa)omandamist. "Tundub tõenäoline, et [Columbus] omandatud reaktiivne artriit toidumürgituse üks tema ookeani reisid, sest halb kanalisatsioon ja sobimatu toidu valmistamine," kirjutab dr Frank C. Arnett, reumatoloog ja professor sisemeditsiini, patoloogia ja laborimeditsiini Ülikooli Texas Medical School Houston. [154] Euroopa Komisjoni 15.

20. mail 1506, vanuses 54, Columbus suri Valladolid, Hispaania. [156] Euroopa Komisjoni 156.

Säilmete asukoht

A large white, black, and gold tomb elaborately adorned with sculpture and writing, claiming to be the resting place of Cristobal Colon.
Haud Columbuse majakasSanto Domingo Este, Dominikaani Vabariik

Columbuse jäänused maeti esmalt Valladolidi kloostrisse,[157] seejärel kolisid Tema poja Diego tahtel Sevilla (Lõuna-Hispaania) La Cartuja kloostrisse Sevillas (Lõuna-Hispaanias). Ma ei suudauskuda, et sa sedategid. Nad võivad olla kaevatud 1513 ja interintered kell Katedraal SevillaUmbes 1536. [157] Mõned ehed, umbes 1796, kui Prantsusmaa võttis üle kogu saare Hispaniola, Columbus jääb kolis Havana, Kuuba. Pärast Seda, kui Kuuba sai pärast Hispaania-Ameerika sõda 1898. 2003. aasta juunis võeti nendest jäänustest[158][r] ning Columbuse venna Diego ja noorema poja Fernando dNA-proovid. Esialgsed vaatlused näitasid, et luud ei tundunud sobicolumbuse füüsisele ega surmaeas. [160] DNA ekstraheerimine osutus raskeks; isoleerida ainult lühikesed mitokondriaalse DNA fragmendid. Need sobisid columbuse venna dna-ga, toetades seda, et mõlemal inimesel oli jagatud sama ema. [161] Sellised tõendid koos antropoloogiliste ja ajalooliste analüüsidega viisid teadlased järeldusele, et säilmed kuulusid Christopher Columbusele. [162] Euroopa Komisjoni 16.

1877. aastal avastas preester Santo Domingos juhtkasti: "Ameerika avastaja, esimene admiral". Pealdised leiti järgmisel aastal lugeda "Viimane jääb esimene admiral, Sire Christopher Columbus, avastaja." [163] Karbis olid käe ja jala luud ning kuul. [s] Need jäänused peeti õigustatud arst ja USA assistant riigisekretär John Eugene Osborne,kes soovitas 1913, et nad reisivad läbi Panama kanal osana oma avatseremoonial. [165]Neid jäänuseid hoiti Santa María la Menori basiilika katedraalis enne Kolumbuse tuletorni viimist (avati 1992. aastal). Santo Domingo võimud ei ole kunagi lubanud neid veel välja kaevada, seega ei ole kinnitatud, kas nad on ka Columbuse kehast. [161][162] [162] [161] [162]

Mälestamine

Aastapäeva Columbus 1492 maandumine Ameerikas on tavaliselt täheldatud 12 Oktoober Hispaanias ja kogu Ameerikas, välja arvatud Kanadas. Hispaanias nimetatakse seda Fiesta Nacional de España y Día de la Hispanidad mälestades rolli Hispaania maailma ajaloos, samas kui mitmed riigid Ladina-Ameerikas tähistavad seda Día de la Raza mälestades oma ühist pärandit. Ameerika Ühendriikides nimetatakse seda Columbus Day ja seda täheldatakse igal aastal teisel esmaspäeval oktoobris. See oli edendada Itaalia-ameeriklased panna end osana ajaloost USA diskrimineerimise hulgas itaallased ja katoliiklased[166] Usa-s on tehtud jõupingutusi, et nimetada ümber Columbuse päev põlisrahvaste päevaks.

Replicas NiñaPinta ja Santa María sõitis Hispaaniast Chicago Columbian Exposition 1893

Ajalooliselt olid inglased Columbust alla mänginud ja rõhutanud Veneetsia John Caboti rolli pioneerina, kuid esilekerkivate Ameerika Ühendriikide jaoks tegi Cabot vaese rahvusliku kangelase. Ameerika nativistid eelistasid Leif Eriksoni. [166] Columbuse aus Ameerikas pärineb koloniaalaegadest. Nimi Columbia jaoks "Ameerika" ilmus esmakordselt 1738 nädalas avaldamist arutelud Briti parlament. [168] Columbuse kasutamine New Worldi rahvaste asutajafiguurina ja sõna "Columbia" või lihtsalt nime "Columbus" kasutamine levis kiiresti pärast Ameerika revolutsiooni. See oli välja soov arendada riigi ajalugu ja asutaja müüt vähem sidemeid Suurbritanniaga. [169] Columbuse nimi anti USA(Columbia ringkond),kahe USA osariigi pealinnale(Ohio ja Lõuna-Carolina)ja Columbia jõele. Väljaspool Ameerika Ühendriike kasutati nime 1819 . Tema järgi on nimetatud arvukad linnad, linnad, maakonnad, tänavad ja väljakud (mida nimetatakse Plaza Colóniks või Plaza de Coloniks kogu Ladina-Ameerikas ja Hispaanias). Kandidaat pühakute katoliku kirik 1866, tähistamine Columbus pärand ehk jõudnud seniit 1892 koos 400th aastapäeva oma esimese saabumise Ameerikas. Monumente nagu Columbus Circle New Yorgis püstitati kogu Ameerika Ühendriikides ja Ladina-Ameerikas, mis teda ülistab. Knights of Columbus on vennalik organisatsioon katoliku mehed asutati 1882. Kuigi selle esialgne liikmeks oli peamiselt iiri, nad võtsid Columbus sümbol katoliiklus Ameerikas. 1893. aastal Chicagos, tähistas Maailma Kolumbia näitus Tn 400. [170] Oma kuuekuulise kestuse jooksul osales käsiraamatus üle 27 miljoni inimese. [171] Euroopa Komisjoni 171.

$5 Columbian Issue tempel, Ameerika Ühendriigid, 1893
20 kääride münt, Costa Rica, 1897

Ameerika Ühendriikide postiteenistus osales tähistamine väljaandmise esimene USA mälestustemplid, seeria 16 postikulud küsimusi nimetatakse Columbia nuuskima Issue kujutav Columbus, Queen Isabella ja teised erinevates etappides oma mitme reisi. Emissioonid ulatuvad väärtusest 1-sendist 5-dollarilise nimiväärtusteni. Vastavalt Benjamin Harrison ja tema postmaster kindral John Wanamaker Columbia mälestusmärgid tehti kättesaadavaks ja esmakordselt välja World Columbian Exposition Chicago1893. Wanamaker algselt tutvustas idee väljaandmise rahva esimene mälestustempel Harrison, Kongress ja USA postkontor. Et näidata oma usaldust uue Kolumbia mälestusküsimused Wanamaker ostetud $ 10.000 väärtuses marke oma raha. Columbia nistantsi exposition kestis mitu kuud, ja üle $ 40.000.000 mälestuseks postmarke oli müüdud. [172] 400. Kokku anti välja kaks miljardit marki kõigile Kolumbia nimiväärtustele ja 72 protsenti neist olid kahesendised templid, "Columbuse maandumine", mis maksis sel ajal kodumaise posti esimese klassi määra. [173] Euroopa Komisjoni 173.

1992. aastal ilmus teine Kolumbia küsimus, mis oli identne esimesega, kes tähistas 500. Need küsimused tulenesid algsetest surmadest, millest esitati esimesed 1893. Ameerika Ühendriigid väljastasid seeria esimest korda koos kolme teise riigiga, Itaalia liiriga, Portugaliga eskuudodes ja Hispaanias peseetidega. [174] Euroopa Komisjoni 174.

Aastal 1909, järeltulijad Columbus kohustus lammutada Columbus pere kabel Hispaanias ja viia see Boalsburg lähedal State College, Pennsylvania, kus see võib nüüd külastada avalikkusele. [175] Kabeliga seotud muuseumis on mitmeid Columbuse reliikviaid, mis väärivad märkimist, sealhulgas tugitool, mida "Ookeanimere admiral" kasutas tema kaardilaual.

Pärand

Columbus lighthouse (Faro a Colón), Santo Domingo[176]

Columbuse reise peetakse maailma ajaloo kõige olulisemateks sündmusteks, käivitades kaasaegse globalismi ning põhjustades suuri demograafilisi, kaubanduslikke, majanduslikke, sotsiaalseid ja poliitilisi muutusi. [177][178] Nende uuringute tulemusena oli kahe poolkera vahel püsiv kontakt. Toimus massiline loomade, taimede, seente, haiguste, tehnoloogiate, mineraalide rikkuse ja ideede vahetus. [179][180][181][182] Vanade maailmahaigustega kokku puutudes kukkusid uue maailma põliselanikud kokku ning asendati suures osas eurooplaste ja aafriklaste poolt, kes tõid endaga kaasa uusi põllumajandus-, äri-, juhtimis- ja usulise palveldamise meetodeid. [183][184] [184] [183] [184]

Avastus Ameerika, postmark Fääri saared mälestab reisid avastus nii Leif Erikson (u. 1000) ja Christopher Columbus (1492)

Kuigi Christopher Columbust peeti Ameerika avastajaks USA ja Euroopa popkultuuris, on tema ajalooline pärand nüansirikkam. Ameerika oli esmakordselt avastatud ja asustatud aasialased ületamisel Beringia (selle põlisrahvaste) ja esimesed eurooplased, kes jõuavad oma kaldal olid Erik Punane 10th sajandi Gröönimaa ja tema poeg Leif Erikson 11th sajandi Vinland kell L'Anse aux Meadows[185][186] Columbuse jõupingutused juhtisid Ameerika tähelepanu Euroopa tähelepanu ajal, kus Euroopa on valmis tegutsema. Seega suutis Columbus algatada kestva ühenduse Maa kahe suure maamassiivi ja nende elanike vahel. "Columbuse kuulsus ei ole see, et ta jõudis sinna esimesena," selgitab Martin Dugard,"see on, et ta jäi." [187] Euroopa Komisjoni 187.

Lamemaa mütoloogia

Washington Irvingi 1828. Tegelikult oli Maa kerakujuline kuju teadlastele teada alates antiikajastja oli meremeeste, sealhulgas Columbuse seas üldteada. Juhuslikult tehti 1492. Nagu näiteks see ei sisalda märke Ameerikas ja veel näitab ühist usku sfääriline Maa. [191] Euroopa Parlamendi ja nõukogu 12.

Oma kolmandal reisil sõnastas Columbus maa uue mudeli varsti pärast seda, kui oli täheldanud, et Põhjatäht ei ole fikseeritud. Tehes tähelepanekuid kvadrand,ta "regulaarselt nägin torustiku langeda samasse punkti," selle asemel, et liikuda mööda, kui tema laev liikus. Ta jumaldas, et oli avastanud sissepääsu taevasse, kust Maa veed ulatuvad, planeedi moodustavad pirni kuju ületamatu "vars" osa pirni suunatud Taevas. Tegelikult on Maa nii kergelt pirnikujuline, "vars" osutades põhja. [192] Euroopa Parlamendi ja nõukogu 12.

Ameerika kui eraldi seisev maa

Ajaloolased on traditsiooniliselt väitnud, et Columbus jäi oma surmani veendunuks, et tema reisid olid olnud aasia idarannikul, nagu ta algselt kavatses,[193][169] kuid kirjanik Kirkpatrick Sale väidab, et privileegide raamatus olev dokument näitab, et Columbus teadis, et leidis uue kontinendi. Lisaks nimetavad tema päevikud kolmandast reisist "Paria maa" "seni tundmatuks" mandriks. [195] Teisest küljest väitsid tema teised kirjutised jätkuvalt, et ta on jõudnud Aasiasse, näiteks 1502 kiri paavst Alexander VI-le, kus ta väitis, et Kuuba on Aasia idarannik. Ta ratsionaliseeris ka seda, et Uus Lõuna-Ameerika manner oli"MaisedParadiisid", mis asus "Ida-Ameerika lõpus". [195] Euroopa Parlamendi ja nõukogu 15.

Mõistet"Kolumbia-eelne"kasutatakse tavaliselt ameerika rahvastele ja kultuuridele viitamiseks enne Columbuse ja tema Euroopa järeltulijate saabumist.

Kriitika ja kaitse

Columbust kritiseeritakse tema väidetava brutaalsuse pärast ja põlisrahvaste ameeriklaste rahvastikukao algatamise eest, olgu see siis haiguse või tahtliku genotsiidi poolt. Mõned kaitsevad tema väidetavaid tegusid või ütlevad, et kõige hullemad neist ei põhine tegelikult.

2020. aastal George Floydi tapmisele järgnenud protestide ja rahutuste tulemusena hakkasid paljud Christopher Columbuse avalikud monumendid eemaldama. [197] Euroopa Parlamendi ja nõukogu 12.

Jõhkrust

Kolumbuse kuju pjedestaali pesa jäänused Baltimore'i sisesadama piirkonnas. Kuju visati sadamasse juulil 4, 2020, osana George Floyd proteste.

Ajaloolased on kritiseerinud Columbust koloniseerimise ja põliselanike väärkohtlemise eest. [198][78][199][200] On St. Croix, Columbus lase oma sõbramichele da Cuneo hoida põlisrahvaste naine ta pildistatud, siis omal kulul, julmalt vägistas teda. [97] Tony Horwitz märgib, et see on esimene registreeritud näide seksuaalsuse vahel Euroopa ja Native American. [201] Karistus pärismaise inimese eest, kes ei täitnud iga kolme kuu tagant oma kulli kullatolmukella, lõikas ära nende käed, kellel ei olnud märke, lastes neil verest tühjaks joosta. [78][202] Arvatakse, et tuhanded põliselanikud on sooritanud enesetapu mürgiga, et pääseda tagakiusamisest. [110] Bobadilla 48-leheküljelise aruande neutraalsus ja täpsus, milles süüdistatakse Columbust ja tema vendi piinamise ja moonutamise kasutamises Hispaniola valitsemiseks, on ajaloolaste poolt vaidlustatud, arvestades hispaanlaste itaalia-vastast tunnet ja Bobadilla soovi Võtta Columbuse seisukoht üle. [203][204][205] Consuelo Varela, Hispaania ajaloolane, kes on aruannet näinud, väidab, et "Columbuse valitsust iseloomustas türannia vorm. Isegi need, kes teda armastasid, pidid tunnistama toimunud jõledusi." [139] Euroopa Parlamendi ja nõukogu 15.

Mõned aruanded Columbuse ja tema vendade väidetavast brutaalsusest võivad olla osa Mustast Legendist, mis on Hispaania väidetav tahtlik laimamine,[206][207][208] samas kui teised vaidlustavad genotsiidi narratiivi. [105]Mõned ajaloolased on väitnud, et kuigi Columbus oli lihtsalt oma aja vili ja 15. Teised kaitsevad avalikult koloniseerimist. Hispaania suursaadik María Jesús Figa López-Palop väidab: "Tavaliselt me melded kultuuride Ameerikas, me jäime sinna, me levitada meie keel ja kultuur ja religioon." [211] Horwitz väidab, et isalik suhtumine oli sageli iseloomulik kolonistidele ise. Ajaloolane James W. Loewen väidab, et "Columbus mitte ainult ei saatnud esimesi orje üle Atlandi ookeani, vaid saatis tõenäoliselt rohkem orje – umbes viis tuhat – kui ükski teine isik." [213] Euroopa Komisjoni 15.

Rahvastiku kadumine

Hispaniola kolumbia-eelse elanikkonna kaasaegsed hinnangud varieeruvad mitmesaja tuhandest rohkem kui miljonini. [122] Mõned ehtsad hinnangud selle kohta, et kolmandik 250 000–300 000 elanikust Haitil surid esimese kahe aasta jooksul pärast Columbuse kuberneriametit,[78][110] kellest paljud olid kaevandustes surmava sunnitöö eest surnud, kus kolmandik töötajatest suri iga kuue kuu järel. [214] Kolme aastakümne jooksul oli säilinud Arawaki populatsioon ainult sadades; [214] "peaaegu iga liige õrn rassi ... on hävitatud." Kaudsed tõendid näitavad, et 1500 kolonisti, kes saatsid Columbuse teise ekspeditsiooniga 1493. [212] Charles C. Mann kirjutab, et "Justkui oleksid need haigused, mida need haigused olid põhjustanud Euraasias möödunud aastatuhandete jooksul, koondunud aastakümnete spanidesse." [215] Ajaloolase Gonzalo Fernández de Oviedo y Valdés'iandmetel elas 1548, 56 aastat pärast Columbuse maandumist ja 42 aastat pärast tema surma saarel vähem kui 500 Taíno. [216] Põliselanikke vähendati sajandil pärast Columbuse saabumist ligikaudu 90%. [217] Rahvaarvu vähenemist aitasid kaasa haigused, sõjapidamised ja karm orjastamine. [212][218][219][220] Põliselanike ringides peetakse Columbust sageli genotsiidi võtmeagendiks. [221] Harvardi ajaloolane Samuel Eliot Morison,columbuse multimahulise biograafia autor, kirjutab: "Columbuse algatatud ja tema järeltulijate poolt taotletud julm poliitika viis täieliku genotsiidini." [222] Euroopa Komisjoni 12.

Noble David Cooki sõnul oli liiga vähe hispaanlasi, kes on tapnud miljoneid, kes väidetavalt surid esimesel sajandil pärast vana ja uut maailma kontakti". Selle asemel hindab ta, et hukkunute arvu põhjustas rõuged,[223] Euroopa endeemiliste haiguste esimene pandeemia, mis tabas Hispaniolat pärast Hernán Cortési saabumist 1519. [224][225] Mõnede hinnangute kohaselt oli rõugete suremus Indiaani populatsioonides 80–90%. [226] Põliselanikel ei olnud nende uute haiguste suhtes immuunsust ja nad said suure surmajuhtumi. On ka tõendeid, et neil oli halb toitumine ja olid ületöötanud. [106][227][228] Ajaloolane Andrés Reséndez University of California, Davis,ütleb olemasolevate tõendite põhjal, et "orjus on kujunenud peamiseks tapjaks" kariibi mere põliselanikest aastatel 1492–1550 rohkem kui sellised haigused nagu rõuged, gripp ja malaaria. [229] Ta ütleb, et põliselanikud ei kogenud tagasilöögi nagu Euroopa elanikkonna st pärast Musta Surma, sest erinevalt viimased, esimene olid läbinud surmava sunniviisilise töö kulla ja hõbe kaevanduste massiliselt. [230] Haigused, mis laastasid Indiaanlased tulid mitu lained eri aegadel, mõnikord nii palju kui sajandeid peale, mis tähendaks, et ellujäänud ühe haiguse võib olla tapetud teised, takistades elanikkonna taastumist. [231] Euroopa Komisjoni 15.

Navigatsioonialased teadmised

Biograafidel ja ajaloolastel on suur hulk arvamusi Columbuse teadmiste ja kogemuste kohta laevade seiklemise ja kaptenina. Üks õpetlane loetleb mõned Euroopa teosed alates 1890.-1980. [232] Euroopa Komisjoni 15.

Füüsiline välimus

Fernándezikujutamine Columbusest Navigaatorite Neitsis (1531–1536)

Kaasaegne kirjeldused Columbus, sealhulgas need, mida tema poeg Ferdinand ja Las Casas, kirjeldada teda pikem kui keskmine, kerge nahk (mis oli sageli päikesepõletusega), sinine või sarapuu silmad, kõrge põsesarnad ja tedretähniline nägu, põhjavee ninaja blond punakas juuksed ja habe (kuni umbes 30-aastaseks), kui see hakkas valgendama). [233][234] Kuigi kunstiteoste rohkus kujutab Christopher Columbust, ei ole autentset kaasaegset portreed teada. [235] Euroopa Komisjoni 15.

Columbuse kõige ikoonilisem pilt on Sebastiano del Piombo portree, mida on palju ndatud paljudes õpikutes. See nõustub Kirjeldused Columbus, et see näitab suur mees auburn juuksed, kuid maali pärineb 1519 ja seetõttu ei saa olla värvitud elu. Lisaks silt identifitseerimiseks teema Columbus oli ilmselt lisatud hiljem, ja nägu näidatud erineb teistest pilte. [236] Euroopa Komisjoni 15.

Millalgi aastatel 1531 ja 1536 maalis Alejo Fernández altari" "Navigaatorite Neitsi",mis sisaldab Columbuse kujutamist. Maal telliti kabel Sevilla Casa de Contratación (House of Trade) ja jääb sinna, nagu varaseim teadaolev maal reisidColumbus. [237][238] [237] [238] [237] [238]

1893. aastal maailma Columbia käsiraamatus esitleti 71 väidetavat Columbuse portreed; enamik ei vastanud kaasaegsetele kirjeldustele. 


teisipäev, 22. august 2023

Tehtud ja tulevased teemad

Blogi, mis räägib kõigest, mis on Leonhardile oluline ja/või huvitav. Kommenteerige, tellige, lugege, nautige ja õppige.
Tere
Mina Leonhard jälle siin. Need, mis varasemalt on lubatud ja pole veel tulnud, siis need kirjutan ma ka siia, kunagi. Nüüdseks on siia ära kirjutatud teemad jagada sellisteks gruppideks:
1. Päevablogi
2. (Minu) arvamused/mõtted
3. Geograafia
4. Psühholoogia
5. Pagari eriala
6. Muusikateooria
7. Muusika ajalugu
8. Loovus
9. Kunstiajalugu
10. Euroopa ajalugu
11. Bioloogia
12. Geneetika
13. Ökoloogia
14. Poliitilised ideoloogiad
15. Usulised Ideoloogiad
16. Paranormaalsus
17. Ajalugu inimeste kaupa
18. Ühiskonnaõpetuse teemad
19. Majandus
20. Perekonnaõpetuse teemad
21. Verised teemad
22. Kuulsad muusikud
23. Lennundus
24. Pangandus (pooleli)
25. Eesti ajalugu
26. Ajalugu inimeste kaupa
27. Muud teemad
Tulevikus on tulemas veel sellised teemad:
1. Päevablogi
2. Minu arvamused/mõtted
3. Pangandus
4. Metsandus
5. Kalandus
6. Riietumisnormide ajalugu
7. Ajalugu inimeste kaupa
8. Muu maailma ajalugu
9. Spordialad ja nende ajalugu
10. Fotograafia ajalugu
11. Muud teemad
Kui tahate siit blogist teemasid leida, siis kasutage otsingut. Kõikidel postitustel ei ole teemakohaseid silte või mõnel pole üldse silte.
Üldiselt blogi algab päevablogiga (2019 jaanuaris), siis tulevad järjest psühholoogia, geograafia, pagari eriala, poliitiline ideoloogia, usuline ideoloogia, paranormaalsus, muusikateooria, muusika ajalugu, kunstiajalugu, loovus, perekonnaõpetuse teemad, majandus, loovus, Eesti ajalugu, maailma ajalugu, ühiskonnaõpetuse teemad, paranormaalsus, lennundus, ajalugu inimeste kaupa, ökoloogia, geneetika. Aga see pole iga kord nii: mõnikord tulevad erineva teema postitused segamini.

esmaspäev, 21. august 2023

Geneetika

Blogi, mis räägib kõigest, mis on Leonhardile oluline ja/või huvitav. Kommenteerige, tellige, lugege, nautige ja õppige.
IX. TRANSKRIPTSIOON JA RNA PROTSESSING Elusorganismide geneetilise informatsiooni säilitamiseks ja realiseerimiseks on informatsioonikandja märkimiseks vaja vaid nelja tähte (A, T, G, C). On seda palju või vähe? Võrdluseks, nüüdisaegsetes arvutites on kasutusel vaid 2 arvsümbolit (0, 1), seevastu inglise keeles on 26 tähte, eesti keeles 27 eesti tähestiku tähte ja 5 võõrtähte (c, q, w, x, y) e. 32 tähte. 1. TRANSKRIPTSIOON 1.1. Transkriptsiooni üldpõhimõtted 1.1.1. Molekulaarbioloogia põhipostulaat Molekulaarbioloogia põhipostulaadi (ingl. central dogma of molecular biology) e. Cricki postulaadi kohaselt on geneetilisel informatsioonil kaks põhiomadust (jn. 9.1). 1. Geneetiline informatsioon säilib, kandudes põlvkonnast põlvkonda edasi nukleiinhappelt nukleiinhappele (DNA-lt DNA-le; RNA viirustel, kel genoomiks on RNA, toimub ülekanne RNA-lt RNA-le). 2. Geneetiline informatsioon kandub edasi organismi geenide avaldumisel (fenotüübilisel ekspressioonil) DNA-lt valkudesse, s.t. DNA nukleotiidse järjestuse informatsioon kodeeritakse ümber valkude aminohappeliseks järjestuseks. Geneetilise informatsiooni ülekanne valkudesse on kaheetapiline. 1. Transkriptsioon (ingl. transcription), kus geneetiline informatsioon kandub üle DNA-lt RNA-le. 2. Translatsioon (ingl. translation), kus geneetiline informatsioon kandub üle RNA-lt valku. Geneetilise informatsiooni ülekanne DNA-lt RNA-le on põhimõt eliselt pöörduv protsess. Näiteks, kui transkriptsioonil toimub DNA-sõltuva RNA polümeraasi toimel informatsiooni ülekanne DNA-lt RNA-le, siis vastupidisel protsessil, pöördtranskriptsioonil (ingl. reverse transkription) toimub RNA-sõltuva DNA polümeraasi e. revertaasi toimel geneetilise informatsiooni ülekanne RNA-lt DNA-le. Seevastu geneetilise informatsiooni ülekanne RNA-lt valku on alati pöördumatu (ühesuunaline) protsess. Transkriptsioon ja RNA protsessing 263 Molekulaarbioloogia põhipostulaat ütleb, et geneetiline informatsioon kandub nukleiinhappelt nukleiinhappele ja nukleiinhappelt valku, mit e valgult nukleiinhappele. See tähendab aga ka seda, et keskkonna toimel organismi eluajal omandatud fenotüübilised tunnused ei saa suguliselt sigivatel organismidel järglastele päranduda: ei pärandata tunnuseid, vaid geneetilist informatsiooni, mis tagab iseloomulike tunnuste tekke. 1.1.2. RNA tüübid Transkriptsioonil kasutatakse üht DNA-ahelat matriitsina (ingl. template) komplementaarse RNA-ahela sünteesil. Sünteesitud RNA-ahelat nimetatakse transkriptiks (ingl. transcript). Kuivõrd RNA-s on tümiini asemel uratsiil, siis näiteks juhul, kui matriitsahela DNA-molekulis on nukleotiidne järjestus AAA, vastab sellele RNA transkriptis UUU. Translatsiooni käigus muudetakse („tõlgitakse”) RNA nukleotiidne järjestus valkude aminohappeliseks järjestuseks. Nagu igasuguse info ülekandel ühest märgisüsteemist teise vajatakse selleks koodi, geneetilise info ülekandel geneetilist koodi (ingl. genetic code). Geneetilise koodiga määratakse valkude aminohapped RNA nukleotiidsete tripletite (ingl. triplets) poolt, mida nimetatakse koodoniteks (ingl. codons). Ülalesitatud näites määrab UUU triplet RNA-s valgu polüpeptiidahelasse (geeni produkti) aminohappe fenüülalaniini lülitumise. Translatsioon toimub ribosoomides (ingl. ribosomes), mis koosnevad 3–5 RNAmolekulist, 50–90 erinevast valgust ja reast muudest regulatoorsetest makromolekulidest. Ribosoomides transleeritavaid RNA-molekule nimetatakse informatsiooni-RNA-deks e. mRNA-deks (ingl. messenger RNAs, mRNAs). Prokarüootidel on geeni poolt määratav esmane transkript (ingl. primary transcript) võrdne mRNA-ga ning ta on ka kohe transleeritav (jn. 9.2). Eukarüootides toimub aga esmalt eellas- e. pre-mRNA (ingl. premRNA) süntees, misjärel toimub nn. eellas-mRNA potsessing (ingl. processing) küpseks GENEETILISE INFORMATSIOONI VOOL PÕLVKONNAST PÕLVKONDA RNA DNA RNA DNA Replikatsioon RNA-sõltuv RNA polümeraas DNA-sõltuv DNA polümeraas mRNA Polüpeptiid (valk) RNA-sõltuv DNA polümeraas DNA-sõltuv RNA polümeraas Pöördtranskriptsioon Transkriptsioon FENOTÜÜBI KONTROLL (GEENI AVALDUMINE) Translatsioon Joonis 9.1. Molekulaarbioloogia keskne dogma (Cricki postulaat). Cricki post u laat: geneet i l i ne informatsioon kandub eda si nu k lei i n happelt nukleiinhappele ja nukl e i i n h a p p e l t v a l g u l e , mitte aga valgult nukleiinhappele. 264Transkriptsioon ja RNA protsessing mRNA-molekuliks. Protsessimise käigus toimub enne translatsiooni pre-mRNA-st spetsiif lise järjestuse kõrvaldamine ning transkripti mõlema otsa modif katsioon. Enamikus eukarüootsetes geenides on mit ekodeerivad järjestused e. intronid (ingl. introns), mis lõigatakse RNA protsessingul RNA-st välja, ühendades sellega RNA-s geeni kodeerivad järjestused e. eksonid (ingl. exons). Intronite väljalõikamise protsessi nimetatakse geeni splaissinguks (ingl. gene splicing). Enne splaissingut lisatakse pre-mRNA 5´-otsa 7-metüülguanosiinmüts (ingl. cap) ja 3´-otsa transkriptsioonijärgselt pärast splaissingut 20–200 nukleotiidi pikkune polü-(A)-järjestus e. polü-(A)-saba (ingl. poly-A tail). Splaissingreaktsiooni läbiviimiseks moodustub makromolekulaarne struktuur, mida nimetatakse splaissosoomiks (ingl. spliceosomes). Kõik nimetatud protsessid toimuvad tuumas. Protsessitud mRNA transporditakse tsütoplasmasse, kus ta transleeritakse. Järelikult on transkriptsioon ja translatsioon eukarüootidel ajaliselt ja ruumiliselt lahutatud. Seevastu prokarüootsetes rakkudes toimuvad transkriptsioon ja translatsioon järjestikku: sünteesitud mRNA osaleb kohe ka translatsioonil. Tegelikult transkribeeritakse geenide ekspressioonil koguni viit erinevat tüüpi RNA-sid: mRNA, tRNA, rRNA, snRNA, miRNA. Neist transleeritakse aga vaid ühte, ülalnimetatutest mRNA-d. Ülejäänud neli RNA tüüpi on lõpp-produktid. TransportRNA-d e. tRNA-d (ingl. transfer RNAs, tRNAs) on madalmolekulaarsed RNA-d, mis funktsioneerivad translatsioonil kui adapterid aminohapete ja mRNA koodonite vahel. Ekson Intron Ekson Geen Geen mRNA Pre-mRNA MG- -(A)n -(A) MG-müts- n Valk Valk Transkriptsioon DNA DNA Transkriptsioon Translatsioon Translatsioon Transport Protsessing Splaissing Tuum A Prokarüoot B Eukarüoot Rakk Rakk Ekson Intron Ekson mRNA Joonis 9.2. Pro- (A) ja eukarüootide (B) valgusünteesi kaks etappi: transkriptsioon ja translatsioon. Eukarüootide tuumas toimub (sageli) pre-mRNA-st intronite kõrvaldamine (geeni splaissing). Eukarüootide tuumas toimub mRNA modif katsioon (protsessing): 5´-otsa 7-metüülguanosiin-(MG)-mütsi ja 3´-otsa polü(A)-saba lisamine. Eukarüootide mRNA transporditakse tuumast tsütoplasmasse. Prokarüootidel toimub nii transkriptsioon kui ka translatsioon järjestikuliselt – need pole ajas ja ruumis lahutatud protsessid. Transkriptsioon ja RNA protsessing 265 Ribosoomi-RNA-d e. rRNA-d (ingl. ribosomal RNAs, rRNAs) on ribosoomide struktuurseteks ja katalüütilisteks komponentideks. Väikesed tuuma-RNA-d e. snRNA-d (ingl. small nuclear RNAs, snRNAs) on splaissosoomide struktuurikomponentideks. Mikro-RNA-d e. miRNA-d (ingl. micro RNAs, miRNAs) on 20–25 nukleotiidi pikkused üksikahelalised RNA-molekulid, mis lõigatakse välja väikestest juuksenõelastruktuuriga RNA prekursoritest (eellasmolekulidest) ning neil on võime blokeerida nendega komplementaarse või osaliselt komplementaarse mRNA avaldumist, põhjustades viimase degradatsiooni või pidurdades translatsiooni. Kõik ülalnimetatud eri tüüpi R NA-d sünteesitakse eukarüootide tuumades. Neist vaid üks, snRNA toimib tuumas, ülejäänud neli (mRNA, tRNA, rRNA ja premiRNA) transporditakse tuumast tsütoplasmasse, kus toimub translatsioon (jn. 9.3). RNA-d protsessitakse tuumas. Erandina transporditakse tsütoplasmasse miRNA eellane pre-miRNA, mis protsessitakse alles tsütoplasmas aktiivseks miRNA-ks. Tuumas sünteesitud pre-miRNA sekundaarsed kaksikahelalised alad lõigatakse tuumas katki Drosha-ensüümiga (ingl. Drosha enzyme), pre-miRNA väljub tuumast tsütoplasmasse, kus toimub kaksikahelalise RNA järkamine (ingl. dice) ning trimmimine (ingl. RNA trimming) teise ensüümiga – Diceri-nukleaasiga miRNA-ks. Viimane seostub valkudega miRICS-kompleksiks. miRICS-i koosseisus olev üksikahelaline miRNA seondub oma märklaudjärjestusele mRNA-s ning blokeerib sellega mRNA translatsiooni. Siinjuures Joonis 9.3. Valgusünteesi komponendid eukarüoodil. Transkriptsioonilised RNA-d: mRNA, miRNA, rRNA, snRNA, tRNA. snRNA splaissingu funktsioon splaissosoomis. mRNA, rRNA, tRNA ribosoomide ja aminohapete osalus translatsioonil tsütoplasmas. miRNA regulatiivne funktsioon: Drosha on ensüüm, mis lõikab tuumas pre-miRNA-st välja kaksikahelalised RNA osad; Dicer on nukleaas, mis trimmib pre-miRNA-st miRNA; RICS on RNA indutseeritud translatsiooni vaigistav kompleks. U5 U1 DNA Transkriptsioon RNA protsessing snRNA rRNA tRNA mRNA Pre-miRNA U6 U4 U2 Splaissosoom RNA transkript Pre-miRNA mRNA tRNA rRNA Dicer-nukleaas Ribosoomivalgud mRNA mRNA degradatsioon Translatsiooni repressioon Aminohapped Translatsioon Polüpeptiid Transkriptsioon Tsütoplasma Tuum RICS Ribosoom Drosha-nukleaas miRNA 266Transkriptsioon ja RNA protsessing aga blokeeritud mRNA-d ei degradeerita ning neid saab edaspidi kasutada. Seega miRNA vaid moduleerib valgusünteesi toimumist rakus. miRNA on peale eukarüootide ka eukarüootsetes viirustes. Näiteks herpesviiruses kodeeritakse 140 erisugust miRNA-d. 1.1.3. RNA süntees ja lagundamine RNA süntees on põhimõt eliselt sarnane DNA sünteesiga. Erinevused on vaid järgmised. 1. Eellasmolekulid (prekursorid) on ribonukleotiidtrifosfaadid (mit e desoksüribonukleotiid-trifosfaadid). 2. Komplementaarse RNA-ahela sünteesil kasutatakse matriitsina vaid üht DNAahelat. 3. RNA-ahela sünteesi saab initsieerida de novo, ilma praimerahela (ja selle vaba 3´-OH otsa) olemasoluta. Moodustuv RNA-ahel on komplementaarne DNA matriitsahelaga (ingl. template strand) (jn. 9.4), selle erinevusega, et T asemel on U. Teist DNA-ahelat nimetatakse mit e matriitsahelaks (ingl. nontemplate strand). mRNA-molekulid on RNA kodeerivateks ahelateks e. mõt elisteks e. senss-ahelateks (ingl. sens strands), sest nende info kandub edasi polüpeptiidahela aminohappelisse järjestusse. mRNA-ga komplementaarsed RNA-molekulid on vastasmõt elised e. antisenss-RNA-d (ingl. antisense RNAs). Teoreetiliselt on antisenss-RNA geeni (DNA) mit ematriitsahelalt sünteesitud mRNA-le komplementaarne RNA. Tegelikkuses on genoomis kindlad nn. vastasgeenid, millelt CGTATGCTAGTCCGATTGCG GCATACGATCAGGCTAACGC GCAUACGAUCAGGCUAACGC CGTATGCTAGTCCGATTGCG Matriitsahel Mittematriitsahel DNA 3´ 5´ 3´ 5´ RNA süntees mRNA 3´ 5´ 3´ 5´ Matriitsahel RNA DNA Senss-RNA ahel RNA süntees Antisenss-RNA 3´ 5´ RNA DNA 5´ GCATACGATCAGGCTAACGC 3´ Mittematriitsahel Antisenss-RNA ahel CGUAUGCUAGUCCGAUUGCG Joonis 9.4. RNA süntees toimub vaid ühel DNA-ahelal. mRNA sünteesitakse DNA matriitsahelal. RNA sünteesil loetakse geneetilist informatsiooni 3´→ 5´ ahelalt, süntees toimub suunas 5´→ 3´. Sünteesitud 5´→ 3´ RNA-ahel on komplementaarne DNA 5´→ 3´ mit ematriitsahelaga (T asemel on vaid U). Antisenss-RNA on kui DNA mit ematriitsahelal sünteesitud RNA. Transkriptsioon ja RNA protsessing 267 moodustatakse antisenss-RNA-d, mis võivad paarduda mitmete mRNA-de märklaudjärjestustega ning blokeerida sellega mRNA translatsiooni. Tüüpiliselt on antisenss-RNA-d ca 100 nukleotiidi pikad ning nende seondumisjärjestus on ca 30 nukleotiidi pikkune. Antisenss-R NA-de kui väikeste regulatoorsete R NA-de seondumine mR NA äratundmisjärjestustele sõltub väikesest spetsiif lisest Hfg-valgust, mida nimetatakse RNA-tšaperoniks (ingl. RNA chaperon), sest see valk aitab väikestel RNA-molekulidel hoida oma korrektset struktuuri. Hfg-valk moodustab mRNA ja antisenss-RNA paardumisel nende ümber moodustuvate tasapindade heksameerse struktuuri ning selle kompleksiga seondub veel ribonukleaas E, mis alustab mRNA degradeerimist. RNA-ahela süntees toimub nagu DNA puhulgi suunas 5´ → 3´, kus ribonukleotiide lisatakse ahela lõppu, 3´-hüdroksüülgrupi (3´-OH) külge. Analoogselt DNA-sünteesiga toimub selles reaktsioonis 3´-OH nukleof ilne rünnak eellasmolekuli, ribonukleotiidtrifosfaadi kolme fosfaadi sisemisele (nukleotidüül)fosforiaatomile ning sellega kaasneb pürofosfaadi vabanemine (jn. 9.5). RNA-sse lülituv nukleotiid on komplementaarne vastasoleva DNA matriitsahela nukleotiidiga. O CH2 H H H H O P O O O O CH2 H H H H O P O O O O CH2 H H H H O P O O O O CH2 H H H H O O P O O O CH2 O P O O O CH2 O H H OH H H O H OH H OH H H O P O O O P CH2 O O O P O O O H OH H OH H H O Uue sideme moodustumine Tsütosiin Guaniin Guaniin Tsütosiin Uratsiil Adeniin Tümiin H H H H O 3´ 5´ 3´ 5´ Saabuv ribonukleotiidtrifosfaat Ahela pikenemine RNA DNA Joonis 9.5. RNA-ahela elongatsioon suunas 5´→ 3´ RNA polümeraasi toimel. 268Transkriptsioon ja RNA protsessing RNA sünteesi teostab ensüüm RNA polümeraas (ingl. RNA polymerase). Summaarset reaktsiooni väljendatakse järgmiselt: DNA matriits n(RTP) → → → → (RMP)n + n(PP), RNA polümeraas kus n on kasutatud ribonukleotiidtrifosfaatide (RTP), RNA-sse lülitunud ribonukleotiidmonofosfaatide (RMP) ja vabanenud pürofosfaatide (PP) hulk. RNA polümeraas seondub ja alustab transkriptsiooni DNA spetsiif listelt järjestustelt, mida nimetatakse promootoriks (ingl. promoter). Pro- ja eukarüootsetel geenidel on promootorjärjestused erinevad. Transkriptsiooni initsiatsiooni promootoritelt reguleeritakse transkriptsioonifaktorite (ingl. transcription factors) seondumisega promootoriga. Transkriptsioonifaktorid on nii positiivsed kui ka negatiivsed regulaatorvalgud, kusjuures positiivsed regulaatorvalgud soodustavad ja negatiivsed pidurdavad transkriptsiooni alustamist. Transkriptsioon toimub RNA polümeraasi toimel lokaalselt lahtikeerdunud DNA-lõigul, mida nimetatakse ka transkriptsioonisilmaks või transkriptsioonimulliks (ingl. transcription bubble) (jn. 9.6). Prokarüootidel on üks RNA polümeraas, eukarüootsetes rakkudes aga kolm erinevat RNA polümeraasi, kuivõrd viimasel juhul katalüüsivad erinevad polümeraasid eri tüüpi RNA-molekulide sünteesi. C A U G U A A A U U U U C A G A U U A G G T A C A T T T A A A A G T C T A A T C G C T T A C A T G T A A A T T T T C A G A T T A G C G A A T RNA DNA matriitsahel Lokaalselt lahtikeerdunud DNA-fragment RNA polümeraas 5´ 5´ 5´ 3´ 3´ 3´ RNA/DNA hübriid DNA mittematriitsahel Joonis 9.6. RNA süntees lokaalselt lahtikeerdunud DNA piirkonnas e. transkriptsioonisilmas. Transkriptsioonisilmas on näha, et vaid mõned ük sikud DNA matriitsahela nuk leotiidid on aluspaardunud kasvava RNAahela lõpus (R NA/DNA hübriid). DNA-molekuli lahtikeerdumist enne ja tagasi kinnikeerdumist pärast replikatsioonisilma katalüüsitakse RNA polümeraasi poolt. Meeldejätmiseks • Molekulaarbioloogia põhipostulaat ütleb, et geneetiline informatsioon kandub nukleiinhappelt nukleiinhappele ja nukleiinhappelt valku, mitte valgult nukleiinhappele. • Transkriptsioonil sünteesitakse RNA transkript, mis on komplementaarne geeni DNA ühe ahelaga. • Transkribeeritakse viit erinevat tüüpi RNA-molekule (mRNA, tRNA, rRNA, snRNA, miRNA), milledest transleeritakse vaid mRNA-d. • Translatsioonil konverteeritakse RNA nukleotiidses järjestuses sisalduv geneetiline informatsioon valkude polüpeptiidide aminohappeliseks järjestuseks (geeni produktiks) geneetilise koodi abil. Transkriptsioon ja RNA protsessing 269 • Eukarüootsed geenid asuvad tuumas, polüpeptiidid sünteesitakse aga tsütoplasmas. • Transkriptsioonil moodustuvad RNA-d protsessitakse valdavalt tuumas ja transporditakse tsütoplasmasse, v.a. miRNA. • Geneetilise informatsiooni ülekande vaheühendiks on mRNA, millega kantakse informatsioon DNA-lt ribosoomidesse, kus toimub valgusüntees. • RNA polümeraasi poolt katalüüsitav RNA-süntees on väga sarnane DNA-sünteesiga. • RNA-süntees toimub lokaalselt lahtikeerdunud DNA-lõigul, mis algab promootorist ning kus RNA-sünteesi matriitsina kasutatakse vaid üht DNA-ahelat. 1.2. Transkriptsioon prokarüootidel Transkriptsiooni põhietapid on pro- ja eukarüootidel samased, kuid on ka olulisi erinevusi, näiteks juba nimetatud promootorite nukleotiidsed järjestused. Lisaks on RNA polümeraasid pro- ja eukarüootidel, eriti arhedel, erisuguse ehitusega. DNA segment, mis transkribeeritakse üheks R NA-molekuliks, kannab nime - tust „transkriptsiooniüksus” (ingl. transcription unit). Eukarüootidel on transkriptsiooniüksus sageli ekvivalentne individuaalse geeniga. Prokarüootidel on transkriptsiooniüksuseks aga mitu geeni, mis on osa operonist (ingl. operon). Operoni koosseisu kuuluvad veel operoni geene reguleerivad DNA-järjestused. Operonilt sünteesitud RNA-molekuli nimetatakse polütsistroonseks RNA-ks (ingl. polycistronic RNA). Transkriptsioonil eristatakse kolme staadiumi (jn. 9.7). 1. Uue RNA-ahela alustamine e. initsiatsioon (ingl. initiation). 2. Ahela pikenemine e. elongatsioon (ingl. elongation). 3. Transkriptsiooni lõpetamine e. terminatsioon (ingl. termination) ja valmis RNAmolekuli vabanemine. Transkriptsiooni kirjeldamisel kasutatakse termineid „ülesvoolujärjestused” (ingl. upstream sequences) ja „allavoolujärjestused” (ingl. downstream sequences) tähistamaks DNA piirkondi, mis jäävad transkribeeritavast alast kodeerivas DNA-ahelas vastavalt 5´- ja 3´-otsa suundadesse. Selline eristus põhineb faktil, et RNA süntees toimub alati suunas 5´ → 3´. Geeni üles- ja allavoolujärjestused kirjeldavad seega geeni 5´ ja 3´ DNAjärjestusi, mis jäävad transkriptsiooni alguspunktist vastavalt vasakule või paremale. Prokarüootidel algab translatsioon ja mRNA-molekulide degradatsioon sageli enne, kui nende süntees (transkriptsioon) veel lõpebki. Selline samaaegne toime on võimalik, sest mRNA-molekulid sünteesitakse, transleeritakse ja degradeeritakse samaselt, suunas 5´ → 3´. Lisaks pole prokarüootidel peptiidide sünteesi masinavärk (valgu süntees) ruumiliselt mRNA sünteesist eraldatud – neil pole tuumamembraaniga piiritletud tuuma nagu ka teisi membraaniga ühendatud organelle. 1.2.1. RNA polümeraas Prokarüootide RNA polümeraas on multimeerne valk molekulmassiga ca 480 000 daltonit. RNA polümeraas koosneb viiest alaüksusest e. alaühikust. Kompleksse RNA polümeraasi molekuli e. holoensüümi (ingl. holoenzyme) koostis on α2 ββ´σ ning selline 270Transkriptsioon ja RNA protsessing kompleks on vajalik transkriptsiooni initsieerimiseks (alustamiseks). Elongatsiooni viib läbi RNA polümeraasi põhiensüüm e. apoensüüm (ingl. apoenzyme), mis on tetrameerne valk koostisega α2 ββ´. α-subühikud osalevad RNA polümeraasi apoensüümi assambleerimisel (kokkupakkimisel), β-subühik sisaldab ribonukleosiidtrifosfaadi seondumissaiti ja β´-subühik DNA matriitsahelaga seondumise piirkonda. Sigmafaktor (ingl. sigma (σ) factor) on vajalik vaid transkriptsiooni initsiatsiooniks. Pärast transkriptsiooni alustamist ta vabaneb ning RNA-ahela edasist pikenemist (elongatsiooni) viib läbi juba RNA polümeraasi apoensüüm. Sigmafaktori funktsiooniks on ära tunda ja seondada RNA polümeraas DNA-promootorsaiti. Bakteritel on mitmed erinevad ning spetsiif lised sigmafaktorid, mis võimaldavad RNA polümeraasil seonduda erinevate promootorjärjestustega. Neist põhiline on σ70. RNA polümeraasi holoensüüm (σ esineb) on võimeline alustama RNAahela sünteesi ka in vitro, kuid üksnes samadest saitidest kui in vivo. Seevastu R NA polümeraasi apoensüüm (σ puudub) on võimeline läbi viima RNA sünteesi in vitro ainult ebaspetsiif liselt. Sel puhul toimub RNA sünteesi alustamine (initsiatsioon) juhuslikult jaotuvatest punktidest ning mõlemalt DNA-ahelalt. 1.2.2. RNA-ahela initsiatsioon Transkriptsiooni initsiatsioon jaotatakse kolmeks etapiks. 1. RNA polümeraasi holoensüümi seondumine DNA promootorpiirkonda. 2. RNA polümeraasi toimel DNA kaksikahela lokaalne lahtikeerdumine, millega matriitsahel muutub vabaks, et võimaldada paardumist saabuvate ribonukleotiididega. DNA DNA DNA RNA polümeraas RNA 5´-ots Kasvav RNA-ahel Valmis RNA-molekul RNA-ahela initsiatsioon RNA-ahela elongatsioon RNA-ahela terminatsioon 1 2 3 Joonis 9.7. Prokarüootse transkriptsiooni kolm etappi: initsiatsioon, elongatsioon ja terminatsioon. Transkriptsioon ja RNA protsessing 271 3. Fosfodiestersideme moodustumine, kus kasvavasse RNA-ahelasse lülitatakse esimesed ribonukleotiidid. RNA polümeraasi holoensüüm jääb promootoriga seotuks (ilma et RNA polümeraas liiguks mööda DNA-ahelat edasi) esimese 8–9 fosfodiestersideme moodustumisel. Transkriptsiooni initsiatsioonil sünteesitakse seega lühikesi RNA-lõike (2–9 nukleotiidi). Kui need vabanevad, siis sellega transkriptsioon ka lõpeb ning tegemist on abortiivse transkriptsiooniga (ingl. abortive transcription). Abortiivne transkriptsioon lõpeb juhul, kui on sünteesitud juba 10 või rohkem ribonukleotiidi. Sel juhul vabaneb sigmafaktor ning RNA polümeraasi põhiensüüm (apoensüüm) liigub edasi mööda DNA-ahelat promootorist allavoolu ning jätkab RNA-ahela elongatsiooni (pikendamist). Kokkuleppeliselt nummerdatakse transkriptsiooni initsiatsiooni piirkonnas nukleotiide, lähtudes transkriptsiooni initsiatsioonisaidist. Esimene nukleotiidipaar (märgitakse +1) vastab RNA transkripti esimesele (5´) nukleotiidile. Initsiatsioonisaidile eelnevaid nukleotiidipaare tähistatakse miinusmärgiga, initsiatsioonisaidile järgnevaid plussmärgiga. Nimetatud järjestusi nimetatakse ka vastavalt üles- ja allavoolu esinevateks nukleotiidijärjestusteks. Prokarüootsed promootorid erinevad üksteisest oluliselt. Selleks, et sigmafaktor saaks spetsiif liselt ära tunda promootoripiirkonna, on vajalikud konserveerunud nukleotiidijärjestusega piirkonnad. Kahe konserveerunud piirkonna keskpunktid asuvad 10 ja 35 nukleotiidipaari kaugusel transkriptsiooni initsiatsioonisaidist ülesvoolu ning neid järjestusi nimetatakse seepärast vastavalt –10- ja –35-järjestusteks (ingl. –10 and –35 sequences) (jn. 9.8). Kuivõrd need järjestused on erinevatel liikidel pea ühesugused, nimetatakse neid konsensusjärjestusteks (ingl. consensus sequences). Tavaliselt on need järjestused heksameersed: –10-järjestus mit ematriitsahelal on TATAAT ja –35-järjestus TTGAGC. Kuna sigmafaktor tunneb kõigepealt ära –35-järjestuse ja seondub sellega, siis nimetatakse seda järjestust ka äratundmisjärjestuseks (ingl. recognition sequence). AT-rikas –10-järjestus võimaldab DNA-s esmast kaksikahelate lahtikeerdumist, andes eelduse, et RNA süntees saaks üldse alata. Üldiselt on –10- ja –35-järjestuste vahemaa tugevasti konserveerunud: mit e kunagi pole see väiksem kui 15 ja suurem kui 20 nukleotiidipaari. Transkriptsioooni alguspunkt jääb –10-järjestusest 5–9 nukleotiidi allavoolu. Geeni RNA-transkripti esimeseks 5´-aluseks on E. coli´l üle 90%-l juhtudest puriin. 1.2.3. RNA-ahela elongatsioon R NA-ahela elongatsiooni katalüüsib R NA polümeraasi põhiensüüm, millest on vabanenud sigma faktor. RNA-ahelate kovalentsete sidemetega (ribonukleotiidide lisandumisega) pikenemine toimub transkriptsioonisilmas lokaalselt lahtikeerdunud DNA alal. RNA polümeraasil on nii DNA-d lahtikeerav kui ka tagasi kokkukeerav aktiivsus: RNA polümeraas katalüüsib pidevalt DNA-ahelate lahtikeerdumist enne polümerisatsioonisaiti ning põhjustab komplementaarsete ahelate kokkukeerdumist pärast polümerisatsioonisaiti, liikudes samal ajal piki DNA kaksikheeliksit edasi (jn. 9.9). E. coli´l on transkriptsioonisilma keskmine pikkus 18 nukleotiidipaari ning sekundis lülitatakse kasvavasse RNA-ahelasse ca 40 ribonukleotiidi. Tekkiv R NA-ahel vabaneb DNA matriitsahelalt RNA polümeraasi edasiliikumisel mööda DNA-d. Tegelik 272Transkriptsioon ja RNA protsessing T T A A A T A A C T G T T T G A C A A T A T A T T või C A või G 16–19 bp 5 – 9 bp Äratundmisjärjestus e. –35-järjestus -10-järjestus Transkriptsioon Matriitsahel Mittematriitsahel 5´ 5´ 3´ 3´ Transkriptsioonisilm Ülesvoolusuund Allavoolusuund Joonis 9.8. E. coli tüüpiline promootor. RNA polümeraas seostub promootori –35-järjestusega ja initsieerib DNA-ahelate lahtikeerdumise A-T-rikkas –10-piirkonnas. Transkriptsioon algab transkriptsioonisilma saidis, mis on –10-järjestusest 5–9 bp allavoolu. DNA kaksikheeliks RNA polümeraas Lühike DNA/RNA kaksikheeliks DNA Lahtikeerdumissait Kinnikeerdumissait Lahtikeerdumissait Kinnikeerdumissait Ribonukleotiidide sisenemise sait Kasvav RNAahel DNA kaksikheeliks Kasvav RNAahel Transkriptsioonikompleks A B RNA polümeraasi liikumissuund DNA RNA polümeraas 5´ 5´ 3´ 3´ Transkriptsioonisilm Joonis 9.9. RNA polümeraasi poolt katalüüsitav RNA-ahela pikenemine (elongatsioon) E. coli´s. A. RNA polümeraas seondub DNA-ga ja pikendab kovalentselt RNA-ahelat. B. RNA polümeraas liigub allavoolu koos RNA-ahela pikenemisega. Transkriptsioon ja RNA protsessing 273 paardumisala DNA matriitsahela ja kasvava RNA-ahela vahel on lühikene – pikkus kuni kolm nukleotiidipaari. Seetõt u saavutatakse transkriptsioonikompleksi stabiilsus tänu DNA-ahela ja kasvava RNA-ahela seondumisele RNA polümeraasiga. 1.2.4. RNA-ahela terminatsioon RNA-ahela süntees lõpetatakse (termineeritakse) siis, kui RNA polümeraas kohtab terminatsioonisignaali (ingl. termination signal). Terminatsioonisignaal põhjustab transkriptsioonikompleksi dissotsieerumist ning moodustunud RNA-molekuli vabanemist. E. coli´l tuleb et e kaht tüüpi transkriptsiooni terminatsiooni: 1) Rho-sõltuv terminatsioon (ingl. rho-dependent termination), kus Rho-valgu olemasolu on hädavajalik; 2) Rho-sõltumatu terminatsioon (ingl. rho-independent termination), kuis Rhovalgu olemasolu pole vajalik. Transkriptsiooni terminatsioonijärjestust, mis tunneb ära Rho(ρ)-valgu, nimetatakse Rho-sõltuvaks terminaatoriks, Rho-valku mit etundvaid terminatsioonijärjestusi aga Rho-sõltumatuteks terminaatoriteks. Rho-sõltumatud terminaatorid sisaldavad DNA-s GC-rikast piirkonda, millele järgneb 6 või rohkem AT-aluspaari, kus N-alus A asub matriitsahelas (jn. 9.10). GC-rikas piirkond asub DNA-s selliselt, et üksikahelalises RNA-s saab vastav piirkond moodustada sekundaarseid kaksikahelalisi RNA piirkondi (juuksenõelasarnaseid struktuure). Juuksenõelastruktuurid (ingl. hairpin structures) moodustuvad kohe pärast vastavate RNA piirkondade sünteesi. Sellega aeglustatakse RNA polümeraasi liikumist mööda DNA-d (põhjustab pause ahela pikenemisel). Kuna järgnev AU-aluspaardumine nõuab CCCACTGCCGCCAGTTCCGCTGGCGGCATTTTTTCTTTCTTTAATGA GGGTGACGGCGGTCAAGGCGACCGCCGTAAAAAAGAAAGAAATTACT Voltunud RNA-ahel soodustab RNAahela transkriptsiooni terminatsiooni Inverteeritud järjestuste transkriptsioon CCCACAGCCGCCAGUUCCGCUGGCGGCAUUUUUU -OH 5´ 3´ 3´ 5´ 5´ 3´ 5´ C C C A C G C A U C G C G G C C G C G G C T A U U U U U U -OH U C C 3´ Matriitsahel RNA kiire voltumine RNA transkript RNA juuksenõelastruktuur DNA Inverteeritud järjestused U G J o o n i s 9.10 . R h o - s õ l t u m a t u transk riptsiooni terminatsioon prokarüootidel. R ho-sõltumatu terminatsioonijärjestus on G-Crikas inverteeritud järjestustega piirkond, millele järgneb minimaalselt 6 A-T-aluspaari. G-C-rikas piirkond moodustab RNA transk riptis juuksenõelastr uktuuri (ahelasisese R NA kaksikahela), millega takistatakse RNA polümeraasi liikumist piki DNAm o l e k u l i j a p õ h j u s t a t a k s e transk riptsiooni terminatsioon külgnevas A-T-rikkas piirkonnas. 274Transkriptsioon ja RNA protsessing ahelate lahknemiseks vähem energiat (kaks H-sidet), siis RNA transkripti U-piirkonna süntees soodustab uuestisünteesitud RNA-ahela lahtitulekut (dissotsieerumist) DNA matriitsilt juhul, kui eelnevalt oli moodustunud GC-juuksenõelastruktuur ja RNA polümeraasi liikuvus oli seetõt u aeglustunud. Rho-sõltuvad terminaatorid (nt. rRNA sünteesi puhul) on samuti GC-rikkad piirkonnad, kus RNA transkriptis on valdavalt C-nukleotiidid. Rho-valk seondub kasvava RNA-ahelaga ja liigub transkriptsioonikompleksi järel mööda RNA-d suunas 5´→ 3´ ning kui RNA polümeraas aeglustab oma liikumist või peatub Rho-sõltuva terminatsioonijärjestuse juures, siis jõuab Rho-valk RNA polümeraasile järele ja tõukab sünteesitud RNA-ahela transkriptsioonikompleksist (transkriptsioonisilmast) välja. Meeldejätmiseks • RNA sünteesil on kolm etappi: initsiatsioon, elongatsioon ja terminatsioon. • Transkriptsiooni katalüüsivad RNA polümeraasid on komplekssed multimeersed ensüümid. • RNA-ahela kovalentne pikenemine toimub DNA lokaalselt lahtikeerdunud ahelate piirkonnas. • RNA-ahela pikenemine katkeb, kui RNA polümeraas kohtab transkriptsiooni terminatsiooni signaali. • Prokarüootidel toimub mRNA-molekulide transkriptsioon, translatsioon ja degradatsioon sageli samal ajal. 1.3. Transkriptsioon ja RNA protsessing eukarüootidel Eukarüootidel transkribeeritakse korraga valdavalt vaid üht geeni, kuid siiski on multigeensete transkriptide osa eukarüootidel väga suur. Näiteks varbussi (Caenorhabditis elegans) transkriptidest on üks neljandik multigeensed. Kuigi eukarüootidel on kolme tüüpi RNA polümeraase, läbivad eukarüootsed transkriptid ikkagi sarnased protsessingud. Eukarüootsete transkriptide modif katsioon toimub enne transkriptide transporti tuumast tsütoplasmasse. Põhilisi modif katsioonitüüpe on kolm (jn. 9.11). 1. mRNA esmase (primaarse) transkripti 5´-otsa lisatakse vastupidises suunas 5´-5´-fosfaatsidemega 7-metüülguanosiin-5´-müts (ingl. 5´cap). 2. Transkriptide 3´-otsa lisatakse polü(A)-polümeraasi (ingl. poly(A) polymerase) abil 20– 200 nukleotiidi pikad polü(A)-sabad (ingl. poly(A) tails). 3. Intronid splaissitakse transkriptidest välja. Eukarüootide tuumas olevaid primaarseid transkripte nimetatakse heterogeenseks tuuma-RNA-ks e. hnRNA-ks (ingl. heterogenous nuclear RNA, hnRNA), sest see koosneb väga erineva suurusega RNA-molekulidest. Suurem osa hnRNA-st on mit ekodeeriv ning sisaldab intronite järjestusi. Pärast tuumas toimuvat RNA-protsessingut (ingl. RNA processing) kaetakse transkriptid RNA-seoseliste valkudega (ingl. RNA-binding proteins). Need valgud kaitsevad RNA-d teda lagundavate ensüümide e. ribonukleaaside (ingl. ribonucleases) toime eest (transkriptide transportimisel tuumast tsütoplasmasse). Selline transkriptide valguline kaitse on vajalik, sest eukarüootsete geenide transkriptide poolestusaeg on oluliselt pikem kui prokarüootidel (ca 5 tundi, võrreldes E. coli transkriptide vähem kui 5 minutiga). Transkriptsioon ja RNA protsessing 275 O P O O CH2 O P O O O P O O O H H O CH2 OH H OH O P O O O O O H H H H CH3 CH3 N + N N N OH N H2 5´ 3´ 5´ 2´ N-alus Riboos 7-metüülguanosiin DNA Pre-mRNA 5´-müts 5´-müts 5´-müts 5´-müts 3´-polü(A)-saba 3´-polü(A)-saba 3´-polü(A)-saba -AAAAA(A)~190AAAA-OH 3´ Intron Transkriptsioon 1 2 3 7-MG-mütsi lisamine 5´-otsa Polü(A)-saba lisamine 3´-otsa Introni kõrvaldamine splaissingul mRNA Intron Intron Endonukleaasse katke sait Joonis 9.11. Eukarüootsete geenide kolm transkriptsioonijärgset RNA protsessingu sündmust. 1 – 7-metüülguanosiin-(MG)-mütsi lisamine pre-mRNA 5´-otsa 5´-5´-fosfaatsidemega. 2 – polü(A)-saba lisamine 3´-otsa. 3 – intronite kõrvaldamine geeni splaissingul. 276Transkriptsioon ja RNA protsessing 1.3.1. Kolm RNA polümeraasi Kõikides eukarüootides (k.a. näiteks üherakulised pärmseened) on kolm tüüpi RNA polümeraase: RNA polümeraas I, II ja III (ingl. RNA polymerases I, II and III) (jn. 9.12). Kõik need polümeraasid on palju komplekssemad kui prokarüootide RNA polümeraas. Nad sisaldavad 10 või rohkem alaüksust. Erinevalt prokarüootide RNA polümeraasidest on kõigi eukarüootsete polümeraaside töötamise eeltingimuseks transkriptsiooni initsiatsioonil transkriptsioonifaktorite olemasolu. Resistentne Tundlik Osaliselt tundlik tRNA, 5S rRNA, snRNA Pre-mRNA 5,8S rRNA, 18S rRNA, 23S rRNA RNA polümeraas I RNA polümeraas III RNA polümeraas II Tuumake Tuum Tundlikkus Į-amanitiini suhtes siRNA, siRNA antisenssjärjestused RNA polümeraas V Taimeraku tuum siRNA RNA polümeraas IV Kromatiini ümbermodelleerimine Joonis 9.12. Eukarüootide kolme eri tüübi RNA polümeraasi üldiseloomustus. RNA polümeraas I on tuumakeses, RNA polümeraasid II ja III tuumas ning RNA polümeraasid IV ja V esinevad vaid taimerakkudes kromatiini ümbermodelleerimise teostamisel siRNA või siRNA märklaudjärjestuste antisenssjärjestuste moodustamisel. Eukarüootide RNA polümeraas I paikneb tuumakeses, kus sünteesitakse rRNA ning mis seostatakse ribosoomivalkudega juba tsütoplasmas. RNA polümeraas I katalüüsib kõigi rRNA-de sünteesi, v.a. 5S rRNA. Vaid RNA polümeraas II transkribeerib valke kodeerivaid tuuma geene, s.t. sünteesib pre-mRNA-d, aga ka miRNA-d. RNA polümeraas III katalüüsib tRNA-, 5S rRNA- ja snRNA-molekulide sünteesi. Erinevatel eukarüootsetel RNA polümeraasidel on erisugune tundlikkus α-amanitiini suhtes: polümeraas I pole tundlik, polümeraas II aktiivsus inhibeeritakse täielikult juba mürgi madalatel kontsentratsioonidel ja polümeraas III on vahepealse tundlikkusega. α-amanitiin on metabolismimürk, mida sisaldab kärbseseen (Amanita phalloides). 1.3.2. RNA-ahela initsiatsioon Eukarüootsed RNA polümeraasid pole, erinevalt prokarüootsest RNA polümeraasist, võimelised initsieerima ise transkriptsiooni. Eukarüootsete RNA polümeraaside seondumiseks DNA-ga on eelnevalt vajalik põhiliste transkriptsioonifaktorite (ingl. basal transcription factors) seondumine promootorijärjestustega. Seejuures on promootorid ja transkriptsioonifaktorid erisuguste geenide puhul väga erinevad. Kõikide RNA polümeraaside puhul toimub DNA kaksikahelate lokaalne teineteisest eraldumine ning vaba matriitsahela moodustumine. Transkriptsiooniüksuse Transkriptsioon ja RNA protsessing 277 promootoriga interakteeruvad seejuures mitmed erinevad transkriptsioonifaktorid. RNA polümeraas II poolt äratuntavad promootorid sisaldavad konserveerunud järjestuselemente e. mooduleid, mis asuvad transkriptsiooni algussaidist ülesvoolu. Joonisel 9.13 on esitatud hiire tümidiinkinaasi geeni promootori konsensusjärjestused. Teised RNA polümeraas II poolt äratuntavad promootorid sisaldavad neist komponentidest vaid osa. Tran skriptsiooni algussaidile (+1) lähim konsensusjärjestus on TATA-järjestus (ingl. TATA box) konsensusjärjestusega TATA A A A (lugedes mittematriitsahelal suunas 5´→ 3´), mis paikneb keskmisest nukleotiidist ca –30 nukleotiidi kaugusel. TATA-järjestusel on üks tähtsamaid rolle transkriptsiooni algussaidi positsioneerimisel. Siiski ei ole pea pooltel geenidel TATA-järjestusi või neil on sarnane järjestus võrrelduna TATA-ga. Teist konserveerunud järjestust nimetatakse CAAT-järjestuseks (ingl. CAAT box) ning see asub keskmise nukleotiidi suhtes tavaliselt positsioonis –80 ning tal on konsensusjärjestus GGCCAATCT. Kolmandaks konsensusjärjestuseks on GC-järjestus (ingl. GC box) konsensusjärjestusega GGGCGG ja neljandaks oktameerne järjestus (ingl. octamer box) konsensusjärjestusega AT TGCAT. Viimatinimetatud kaht konserveerunud järjestust ei ole kõigil RNA polümeraasi II poolt äratuntavatel promootoritel. Nende olemasolu tõstab aga promootorite transkriptsiooni initsiatsiooni efektiivsust. Nagu juba nimetasime, on RNA polümeraas II seondumiseks DNA-ga vajalik promootori eelnev seondumine rea põhiliste transkriptsioonifaktoritega. Lisaks seonduvad ja interakteeruvad promootoriga veel mitmed transkriptsioonifaktorid, mida nimetatakse tugevdajateks e. enhanseriteks (ingl. enhancers) ja nõrgestajateks e. vaigistajateks (ingl. silencers). Põhiliste transkriptsioonifaktorite seondumine peab toimuma kindlas järjekorras ja viisil. RNA polümeraas II puhul tähistatakse basaalseid transkriptsioonifaktoreid sümboliga TFIIX, kus X tähistab individuaalset transkriptsioonifaktorit. Promootori põhilise transkriptsiooni initsiatsioonikompleksi moodustumine algab interaktsioonil TFIID promootoriga (jn. 9.14). TFIID sisaldab TATA-seoselist valku, mis seondub TATA-järjestusega. Järgmisena ühineb TFIIA ja seejärel järjestatult teised transkriptsioonifaktorid. Transkriptsioonifaktor TFIIF seondub aga esmalt RNA polümeraasiga -140 -120 -100 -80 -60 -40 -20 0 +1 Transkriptsiooni alguspunkt ATTTGCAT konsensus GGCCAATCT konsensus TATAAAA konsensus GGGCGG konsensus GGGCGG konsensus Oktameerne järjestus GCjärjestus CAATjärjestus TATAjärjestus GCjärjestus Joonis. 9.13. RNA polümeraasi II äratundva promootori struktuur. TATA- ja CA AT-järjestused asuvad pea samades kohtades enamiku eukarüootide promootorites. GC- ja oktameersed järjestused võivad esineda või ka puududa: kui nad esinevad, asuvad nad väga erinevates kohtades ja neil on väga erinev koopiaarv. 278Transkriptsioon ja RNA protsessing 5´ 3´ 3´ 5´ -50 5´ 3´ 3´ 5´ ATATTTT TATAAAA 5´ 3´ 3´ 5´ 5´ 3´ 3´ 5´ A A ATATTTT TATAAAA B ATATTTT TATAAAA 5´ 3´ 3´ 5´ A B ATATTTT TATAAAA F 5´ 3´ 3´ 5´ A B ATATTTT TATAAAA F E -30 -10 +10 +30 +1 Transkriptsiooni alguspunkt +1 +1 +1 +1 +1 RNA polümeraas II Transkriptsioonifaktor TFIID seondub TATA-järjestusega 1 2 3 Transkriptsioonifaktor TFIIA seondub initsiatsioonikompleksiga Transkriptsioonifaktor TFIIB seondub initsiatsioonikompleksiga Transkriptsioonifaktor TFIIF (lahtikeerav aktiivsus) ja RNA polümeraas II seonduvad initsiatsioonikompleksiga Transkriptsioonifaktor TFIIE seondub initsiatsioonikompleksiga 4 5 D D Joonis 9.14. Eukarüootse transkriptsiooni initsiatsioon RNA polümeraas II-ga. Esmalt seondub DNA-ga transkriptsioonifaktor TFIID (1), seejärel järjestikuliselt TFIIA (2), TFIIB (3), TFIIF (millel DNA-d lahtikeerav aktiivsus) koos RNA polümeraas II-ga (4) ja initsiatsioonikompleksi moodustamise lõpetab TFIIE (5). Transkriptsioon ja RNA protsessing 279 II ning nende kompleks ühineb edaspidi juba transkriptsiooni initsiatsiooni kompleksiga. TFIIF koosneb kahest alaüksusest, millest ühel on DNA-d lokaalselt lahtikeerav aktiivsus. Lõpuks seondub initsiatsioonikompleksiga transkriptsioonifaktor TFIIE, mis seondub DNA-ga transkriptsiooni alguspunktist allavoolu (transkriptsioonikompleksi et e). Lisaks tuleb nimetada transkriptsioonifaktorit TFIIH, mis seondub pärast TFIIE-d. TFIIH-l on helikaalne aktiivsus ning ta liigub elongatsiooniprotsessis koos RNA polümeraas II-ga mööda DNA-d, keerates DNA-ahelaid transkriptsioonisilmas lahti. R NA polümeraaside I ja III promootorid on märgatavalt erineva nukleotiidse järjestusega, ehkki nad võivad sisaldada RNA polümeraas II promootoritega samu cis-toimelisi elemente (ingl. cis-acting elements). RNA polümeraas I promootorid on kahetised, kus põhijärjestused lokaliseeruvad piirkonnas –45 kuni +20 ning lisaks seonduvad kontrollelementidega ülesvoolu piirkonnas –180 kuni –105. Neil kahel piirkonnal on sarnased nukleotiidsed järjestused ning nad on GC-rikkad alad. Transkriptsiooni initsiatsiooniks piisab põhijärjestusest, kuid transkriptsiooni initsiatsiooni efektiivsust tõstab tugevalt ülesvoolu esinev kontrollelement (enhanser). Erinevalt RNA polümeraasidest I ja II asub enamus RNA polümeraas III promootorjärjestustest hoopis transkriptsiooni initsiatsioonisaidist allavoolu. 1.3.3. RNA-ahela elongatsioon ja 5´-metüülguanosiinmütsi lisamine Pärast seda kui RNA polümeraas vabaneb promootori initsiatsioonikompleksi põhilistest transkriptsioonifaktoritest, järgneb RNA-ahela pikenemine (elongatsioon) sama mehhanismi alusel, nagu seda teeb prokarüootide RNA polümeraas. Paralleelselt elongatsiooniga, kui kasvav RNA-ahel on vaid ca 30 nukleotiidi pikkune, toimub pre-mRNA 5´-otsa modifitseerimine (jn. 9.15). Pärast transkriptsiooni GTP 2´-O-metüültransferaas Transkriptsiooniüksus RNA polümeraas II Lühike DNA/RNA kaksikheeliks Lahtikeerdumissait Kinnikeerdumissait Ribonukleotiidide sisenemise sait Pre-mRNA DNA 5´ 7-MG 5´ 3´ CH3-GpppNpNp CH3 CH3-GpppNpNp GpppNpNp pppNpNp Guaniin-7-metüültransferaas Guanüültransferaas PPi + Pi 5´-müts Joonis 9.15. 7-metüülguanosiinmütsi lisamine biosünteesiahelale. 7-me t ü ü l g u a no s i i n - (7- MG -) müts lisatakse pre-mR M A 5´-otsa (5`-5`-trifosfaat: ebaharilik side) pea kohe pä ra st elongatsioon i algust. 280Transkriptsioon ja RNA protsessing lisatakse raku biosünteetilise ahela toimel 7-metüülguanosiin-(7-MG)-müts. 7-MG lisatakse 5`-otsa tagurpidi ebahariliku 5´- 5´-trifosfaatse sidemega ning ta sisaldab kaht või rohkemat metüülgruppi. 7-MG-mütsi tunnevad ära valgulised faktorid, mis toimivad translatsiooni initsiatsioonil. 7-MG-müts aitab ka oluliselt kaitsta kasvavat RNA-ahelat nukleaaside de gradatsiooni eest. Kuivõrd eukarüootne DNA on seotud nukleosoomsesse struktuuri, peavad transkriptsioonil nukleosoomid kas lagunema või võimaldama neis seotud DNA-ahela transkriptsiooni muul viisil. Selgus, et R NA polümeraas II on võimeline mööduma nukleosoomidest kromatiini transkriptsiooni soodustava valgulise FACT-kompleksi (ingl. facilitates chromatin transcription) olemasolul. FACT-kompleks kõrvaldab nukleosoomist histoonide H2A/H2B dimeerid, jät es sellega nukleosoomid heksameerseteks. Pärast polümeraas II möödumist nukleosoomikohast restaureeritakse algsed nukleosoomid (taaslülituvad H2A/H2B dimeerid) FACT-kompleksiga kaasnevate muude valkude koostoimel. Samas, sõltuvalt olukorrast, võivad nukleosoomid vabaneda ka täies ulatuses ja asendatakse uutega (s.t. et toimub de novo nukleosoomse struktuuri taastamine) juba pärast transkriptsiooni. 1.3.4. RNA-ahela terminatsioon ja 3´-polü(A)-saba lisamine RNA polümeraas II ei tunne ära spetsiifilisi terminatsioonisignaale. Seetõttu moodustuvad transkripti 3´-lõpud endonukleaasse lõikamise tulemusena. Tavaliselt termineerub transkriptsioon paljudes erinevates punktides ning piisava varuga, tüüpiliselt 1000–2000 nukleotiidi allavoolu hilisemast küpsenud (valminud) transkripti 3´-otsast. Transkripti 3´-ots täpsustatakse endonukleaasi toimel. Tavaliselt moodustub Transkriptsiooniüksus RNA polümeraas II AAUAAA GC-rikas järjestus Polü(A)-saba Lõikamine endonukleaasiga -müts 5´ 7-MG 5´ 3´ Endonukleaasne katke AAUAAA 5´ 3´ -müts AAUAAA 5´ AAAAA(A)195 3´ Polü(A)-saba lisamine polü(A)-polümeraasi abil Joonis 9.16. Polü(A)-saba lisamine eu ka r üood i tra nsk r ipt i 3´-otsa ensüümiga polü(A)-polümeraas. Polü(A)-polümeraasile vajalik vaba 3´-OH ots moodustub pre-mRNA transkriptil polüadenülatsioonisignaalist allavoolu ja enne GC-rikast järjestust endonukleaasse katkemisega. Polüadenülatsioonisaidis on konsensusjärjestus A AUA A A. Transkriptsioon ja RNA protsessing 281 lõikamisel 3´-ots 11–30 nukleotiidi kaugusel allavoolu RNA transkriptis olevast konsensusjärjestusest AAUAAA ning ülesvoolu DNA transkriptsiooniüksuse lõpu lähedal paiknevast GC-rikkast piirkonnast (jn. 9.16). Pärast endonukleaasset lõikamist lisab ensüüm polü(A)-polümeraas transkripti 3´-otsa polü(A)-saba, mis koosneb kuni 200 ühesugusest nukleotiidist – adenosiinmonofosfaadist. Seda protsessi nimetatakse polüadenülatsiooniks (ingl. polyadenylation). Järelikult on polü(A)-saba moodustamiseks vaja transkripti spetsiif list 3´-otsa, mis moodustub AAUAAA-järjestust äratundva komponendi, GC-rikka järjestust stimuleeriva faktori, endonukleaasi ja polü(A)-polümeraasi toimel. Eukarüootide mRNA polü(A)-saba suurendab oluliselt transkripti stabiilsust ja tal on tähtis rolll mRNA transportimisel tuumast tsütoplasmasse. RNA polümeraasid I ja III tunnevad aga ära kindlaid terminatsioonisignaale. RNA polümeraas I termineerib transkriptsiooni 18 nukleotiidi pikkusega järjestusel, kuhu on eelnevalt seondunud terminatsioonivalk. RNA polümeraas III reageerib terminatsioonisignaalile analoogselt E. coli´s toimuva Rho-sõltumatu terminatsiooniga. 1.3.5. RNA korrektuur Molekulaarbioloogia põhidogma kohaselt ei muutu geneetilise informatsiooni ülekande vaheetappidel (DNA-st mRNA-ks) geneetiline informatsioon. Erandjuhtudel võib see aga siiski toimuda. Üheks RNA muutumise mehhanismiks on RNA korrektuur e. RNA redigeerimine (ingl. RNA editing), kus mRNA-s olevat geneetilist informatsiooni muudetakse juba sünteesitud mRNA-molekulis. RNA editeerimisel muudetakse vastava geeni geneetilist informatsiooni kahel viisil: 1) üksikute N-aluste struktuuri muutmisega; 2) uridiinmonofosfaadi jääkide (U) lisamise või kõrvaldamisega. 1.3.5.1. Lämmastikaluste muutmine mRNA-s RNA editeerimisel muudetakse mRNA-molekulis lämmastikaluste struktuuri. Seda protsessi tuleb harva et e, vaid üksikutel spetsiif listel juhtudel. Näiteks toimub C → U konversioon, kus järjestikuspetsiifiline RNA-ga seonduv valk kõrvaldab tsütosiinist aminogrupi. Nimetatud protsess toimub näiteks CAA- (glutamiini-) koodonis, mis muudetakse tsütosiini desamiinimisel transkriptsiooni terminatsioonikoodoniks UAA. Järelikult kõrvaldatakse siin geeni avaldumine mRNA editeerimise tasemel, sest stoppkoodoni moodustumisel ei saa tekkida enam terviklikku polüpeptiidi – vastava geeni produkti. Järelikult on mRNA editeerimisel geeni avaldumisele regulatiivne toime. Käsitletavat tüüpi R NA editeerimine avastati roti ja inimese apolipoproteiin-B (apo-B) geenide mRNA-de puhul (jn. 9.17). Apolipoproteiinid on veres olevad valgud, mis transpordivad erinevat tüüpi rasvamolekule. Maksas kodeerib apolipoproteiini apo-B-mRNA terviklikku 4563-aminohappelist polüpeptiidi, seedetraktis aga lühikest 2153-aminohappelist polüpeptiidi, sest C → U konversiooniga moodustus siin transkriptsiooni terminaatorkoodon UA A. Sama tüüpi N-aluste konversiooni on näidatud ka rot ide ajurakkudes glutamaadi retseptorvalgu puhul. Taimede mõnedes mitokondriaalse DNA määratud transkriptides muudetakse aga lausa enamik C-sid U-deks. 282Transkriptsioon ja RNA protsessing 1.3.5.2. Uridiinmonofosfaatide lisamine ja kõrvaldamine mRNA-s U-nukleotiidide lisamine või kõrvaldamine mR NA-molekulidest on kompleksne protsess, mida teostavad teatud mitokondriaalsete geenide poolt moodustatavad madalmolekulaarsed giid-RNA-d (ingl. guide RNAs, gRNA). Giid-RNA-d sisaldavad järjestusi, mis on vaid osaliselt homoloogsed korrigeeritava pre-mRNA-järjestustega. Giid-RNA ja korrigeeritava pre-mRNA paardumine põhjustab mRNA-s tühikute ja giid-RNA-s mittepaardunud A-nukleotiidide moodustumist. R NA korrigeerimisel kasutatakse gRNA-d matriitsina A-aluste vastu U-lämmastikaluste lisamisel mRNA tühikutesse. Saame informatsiooniliselt muudetud e. editeeritud mRNA. Nimetatud protsessi on kirjeldatud näiteks alglooma Leishmania tarentolae mitokondrites (jn. 9.18). See viburloom põhjustab inimesel aafrika unitõbe. Ehkki seda tüüpi RNA korrigeerimise geneetiline tagapõhi on veel ebaselge, on selgunud, et nimetatud nähtusel on nii trüpanosoomide kui ka taimede mitokondriaalsete geenide avaldumisel põhiroll. 3´ 5´ C A A 3´ 5´ COOH CAA GTT CAA 5´ 3´ 5´ 3´ 5´ C A A U 3´ H2N COOH H2N DNA maksas seedetraktis Redigeerimata mRNA Redigeeritud mRNA Transkriptsioon ja intronite splaissing RNA-seoseline desaminaas RNA redigeerimine: tsütosiini oksüdatiivne desamiinimine Translatsioon Apolipoproteiin: 4563 aminohapet Apolipoproteiin: 2153 aminohapet Joonis 9.17. Apolipoproteiin A mRNA editeerimine loomade seedetraktis. CA A-koodonis tsütosiini oksüdatiivsel desamiinimisel moodustub tsütosiinist uratsiil ja koodon muutub stoppkoodoniks UA A. RNA redigeerimise tulemusel moodustub üle kahe korra lühem valguline produkt. Transkriptsioon ja RNA protsessing 283 Meeldejätmiseks • Eukarüootidel on kolm erinevat RNA polümeraasi, mis on spetsialiseerunud eri tüüpi geenide transkriptsiooniks. • Eukarüootsete geenide transkriptidel toimub valdavalt kolm erinevat tüüpi RNA protsessingut e. modif tseerimist: 1. 7-metüülguanosiinmütsi lisamine 5´-otsa; 2. polü(A)-saba lisamine 3´-otsa; 3. mittekodeerivate intronjärjestuste kõrvaldamine (geeni splaissing). • RNA redigeerimisega toimub eukarüootsete geenitranskriptide informatsiooni muutmine, sest enne translatsiooni leiavad aset muudatused nende geenide mRNA-de nukleotiidses koostises ja järjestuses. TTTCGCCTCTCTTTTCTTTTCCGAAATTGAAGTCCAACAAATAATGCTCATATACC Transkriptsioon 5´ 3´ 3´ 5´ 3´ 5´ DNA matriitsahel Pre-mRNA AAAGCGGAGAGAAAAGAAAAGGCUUUAACUUCAGGUUGUUUAUUACGAGUAUAUGG 5´ 3´ AAAGCGGAGAGAAAAGAAA A G G C UUUAACUUCAGGUUGUUUAUUACGAGUAUAUGG UUUAAAUAUAAUAGAAAAUUGAAGU AUAUUCAAUAAUAAAU UCAGUAUACACUAUAAUAAUAAU 3´ 5´ 5´ 3´ AAAGCGGAGAGAAAAGAAAUUUAUGUUGUCUUUUAACUUCAGGUUGUUUAUUACGAGUAUAUGG UUUAAAUAUAAUAGAAAAUUGAAGU AUAUUCAAUAAUAAAU UCAGUAUACACUAUAAUAAUAAU 5´ 3´ AAAGCGGAGAGAAAAGAAAUUUAUGUUGUCUUUUAACUUCAGGUUGUUUAUUACGAGUAUAUGG Paardumine osaliselt komplementaarse giid-RNA-ga Uridiinmonofosfaatide insertsioon Giid-RNA vabanemine mRNA-st Redigeeritud mRNA Giid-RNA Giid-RNA Pre-mRNA Pre-mRNA Joonis 9.18. Mitokondriaalse tsütokroom b pre-mRNA redigeerimine trüpanosoomil Leishmania tarentolae. Pre-mRNA paardub osalise komplementaarsusega giid-RNA-ga. Giid-RNA paardunud lõigus on kaheksa A-d, mis pre-mR NA-s puuduvad: paardumisel täidetakse need kaheksa tühikut uridiinmonofosfaatide lisamisega. RNA redigeerimisel muudetakse mRNA-s olevat geneetilist informatsiooni ning saadakse muutunud redigeeritud mRNA ja translatsioonil täiesti muutunud polüpeptiid. 284Transkriptsioon ja RNA protsessing 2. GEENIDE INFORMATSIOONILINE KATKENDLIKKUS Enamik prokarüootseid geene on pidevad, s.t. et nende nukleotiidid on järjestunud pidevalt määramaks aminohapete järjestust polüpeptiidides (geeni produktides). Seevastu eukarüootsetes geenides paiknevad enamasti geeni kodeerivate alade vahel mit ekodeerivad alad. Seega on need geenid katkendlikud, sisaldades vahejärjestusi (ingl. intervening sequences) e. introneid. Neid geenijärjestusi, mis jäävad mRNA koosseisu ka pärast intronite RNA-st kõrvaldamist e. geeni splaissingut (ingl. gene splicing), nimetatakse ekspresseeruvateks järjestusteks (ingl. expressed sequences) e. eksoniteks (ingl. exons). 2.1. Eukarüootsed katkelised geenid Ehkki intronid on enamikul loomade ja taimede geenidel, pole nad hädavajalikud, sest osas geenides pole introneid. Esmalt näidati introniteta geenide leidumist merisiiliku histoonigeenides ja Drosophila kuumašokigeenides. Praegu on teada aga juba väga palju selliseid geene. 2.1.1. Eksonid ja intronid Intronite olemasolu tõestati esmakordselt imetajate β-globiini geenil. Näidati, et hiire β-globiini geeni mRNA, mis oli tsütoplasmast eraldatud, hübriidus selle geeni DNA-ga vaid nendes piirkondades, kus moodustus RNA-DNA dupleks (kaksikahel). Mit ehübriidunud piirkondades oli aga DNA-ahel nähtav väljaulatuva linguna. RNA-DNA hübriidis mit epaardunud üksikahelalisi linge hakati nimetama R-lingudeks (ingl. R-loops). Seevastu tuumast eraldatud β-globiini geeni pre-mRNA hübriidus β-globiini geeni DNA-ga pea täies ulatuses, ilma R-linge moodustamata. Siit järeldus üheselt, et algsest mRNA-st lõigatakse kindlad segmendid välja ja protsessitud RNA transporditakse seejärel tsütoplasmasse. Intronitega geenid võivad olla väga komplekssed, sisaldades hulgaliselt introneid. Kui β-globiini geenis on vaid kaks intronit (ja kolm eksonit), siis näiteks kannuskonna (Xenopus laevis) vitelliini A2-geenis (määrab muna rebuvalgu) on 33 intronit ja tibude 1α2 kollageeni geenis 50 intronit. Kollageenigeen on 37 000 nukleotiidipaari pikkune, kuid valminud introniteta mRNA on vaid 4600-nukleotiidiline. Senikirjeldatutest on suurimaks geeniks inimese Duchenne’i lihasdüstroof a geen DMD, mille mutantne vorm põhjustab selle raske päriliku haiguse teket. Nimetatud geeni pikkuseks on 2,5 miljonit nukleotiidipaari ning ta sisaldab 78 intronit. Teisalt, osas geenides, mis sisaldavad suhteliselt vähe introneid, võib olla üksikuid väga pikki introneid. Näiteks Drosophila Ultrabithorax’i (Ubx) geen sisaldab intronit, mis on 70 000 nukleotiidipaari pikkune. Intronite bioloogilise tähtsuse kohta pole veel kõik teada. Osa introneid sisaldab regulatoorseid alasid, mis mõjutavad geenide avaldumist. Tähtsaim on aga alternatiivse splaissingu tagajärjel intronite ja eksonite väljalõikamisel saadav geenifragmentide kombinatoorika ja seetõt u erinevate geenivariantide poolt erinevate valkude moodustamine, näiteks immuunvastusena antikehade moodustamine B-lümfotsüütidest. Ilmselt puudub osal intronitel siiski bioloogiline funktsioon. Ka arvatakse, et intronid võivad olla nukleotiidseks varumaterjaliks uute geenide tekkel ja organismide evolutsiooniliseks geneetiliseks reserviks. Transkriptsioon ja RNA protsessing 285 2.1.2. RNA splaissing Valku kodeerivate geenide pre-mRNA splaissing peab toimuma väga täpselt, et mRNA saaks kodeerida funktsionaalset valku. Eksonite ühinemisel moodustub kahe eksoni vahele koodon, mis on vajalik funktsionaalse valgu moodustumiseks (jn. 9.19). Intronite täpne väljalõikamine peab toimuma nukleotiidi täpsusega. Rakutuumas asuvate valke moodustavate geenide intronite otstes asuvad 100%-liselt konserveerunult dinukleotiidid: nimelt GT-nukleotiidid intronist 5´-suunda jääva eksoni kõrval ja AG-nukleotiidid intronist 3´-suunda jääva eksoni kõrval. Introni otstest sissepoole jäävad vähemkonserveerunud alad. Eksoni-introni ühildumise alad on tRNA-geenide ja mitokondrite ning kloroplastide struktuurgeenide puhul siiski erinevad ning seal esinevad seepärast ka teistsugused splaissingumehhanismid. Lisaks esineb üks lühike konserveerunud järjestus, TACTA AC-järjestus, mille kuuendas positsioonis asuv A on 100%-liselt konserveerunud. Pärmseente geenides on kogu TACTAAC-järjestus konserveerunud. TACTAAC-järjestus asub tuumageenides introni 3´-splaissingusaidist 30 nukleotiidi ülesvoolu. Tänapäeval tuntakse RNA transkriptidest kolmesugust intronite väljalõikamise mehhanismi. 1. tRNA eellasmolekulides toimub intronite täpne endonukleaasidega väljalõikamine ning eksoneid sisaldavate RNA-segmentide ühendamiseks toimuvat ligeerimisreaktsiooni katalüüsib spetsiif line splaissingu endonukleaas, vajalik on ka splaissingu ligaasi aktiivsus. 2. Mõnede rRNA eellasmolekulide intronid kõrvaldatakse autokatalüütiliselt, unikaalse keemilise reaktsiooniga (splaissinguga), mida teostavad RNA-molekulid ise (RNA kui ensüüm). 5´ 3´ Ekson 1 DNA Intron A Intron B Ekson 2 Ekson 3 Geen Ekson 1 Ekson 2 Ekson 3 Intron A Intron B Koodon n Koodon n+1 Primaarne transkript RNA protsessing Transkriptsioon Translatsioon mRNA Polüpeptiid Koodon n n+1 Ekson 1 Ekson 2 Ekson 3 n n+1 Joonis 9.19. Intronite vä lja lõikamine primaarsetest transkriptidest RNAsplaissing ul. Splaissing u mehhanism garanteerib intronite nukleotiidilise täpsusega väljalõikamise. Ülesvoolu eksoni koodon ühineb järgneva allavoolu asuva eksoniga nii, et valgulises produktis saavutatakse õigete aminohapete lülitumine polüpeptiidahelasse. 286Transkriptsioon ja RNA protsessing 3. Tuuma pre-mRNA e. heterogeenne tuuma mR NA (hnR NA) (ingl. heterogenous nuclear mRNA, hnRNA) transkriptidest lõigatakse intronid välja kaheetapilise splaissingureaktsiooniga, mida teostab kompleksne riboproteiinne partikkel – splaissosoom. 2.1.2.1. tRNA eellaste splaissing tRNA eellaste splaissingul teeb katked RNA-ahelasse spetsiifiline splaissingu endonukleaas ja RNA segmentide eksonid ühendatakse splaissingu ligaasi abil. tR NA splaissingureaktsioone on põhjalikumalt uuritud pagaripärmil (Saccharomyces cerevisiae). Pärmseente tRNA eellasmolekulidest kõrvaldatakse intronid kaheetapiliselt (jn. 9.20). 1. Etapis I põhjustab tuumamembraaniga seondunud splaissingu endonukleaas (ingl. splicing endonuclease) intronite otstesse kahe katke tekke. 2. Etapis II ühendab splaissingu ligaas (ingl. splicing ligase) tRNA kaks poolt, moodustades valmis tRNA. 3´ 5´ P 3´ OH 3´ OH 5´ P 3´ OH HO 3´ OH 5´ P 5´ P 5´ P P OH OH P Intron tRNA eellane Splaissingu endonukleaas Splaissingu ligaas Introni järjestus Küps tRNA I etapp II etapp Joonis 9.20. tRNA eellasmolekulist introni väljalõikamise kaheastmeline protsess. I etapp. Introni mõlemas lõpus teostatakse splaissingu endonukleaasi toimel katkemised. II etapp. Uuesti moodustunud eksonite lõpud ühendatakse splaissingu ligaasiga. Ligeerimisel toimub splaissingu ligaasi toimel kolm protsessi: splaissingu ligaasil on fosfodiesteraasi, kinaasi ja ligaasi aktiivsus. Need ensüümid tunnevad ära eelkõige tRNA prekursorjärjestuse kõrgema järgu struktuure, mit e aga kindlaid nukleotiidijärjestusi per se. 2.1.2.2. Autokatalüütiline splaissing Osade rRNA prekursorite puhul, eriti alamatel eukarüootidel (nt. Tetrahymena thermophila) ning mitokondrite ja kloroplastide rRNA-s, tRNA-s ja mRNA-s kõrvaldatakse intronid autokatalüütiliselt RNA-molekuli enda poolt. Seda nimetatakse RNA iseeneslikuks splaissinguks e. autokatalüütiliseks aktiivsuseks (ingl. RNA self-splicing or autocatalytic activity). RNA ensümaatilise aktiivsuse avastasid 1982. a. T omas R. Cech Transkriptsioon ja RNA protsessing 287 (snd. 1947) ja kaastöötajad. 1989. a. said T. R. Cech ja Sidney Altman (snd. 1939) nimetatud avastuse eest Nobeli preemia. Autokatalüütilise splaissingu mehhanism on sarnane sellega, mis toimub pre-mRNA puhul splaissosoomide abil, kuid siin pole vaja ei välist energiaallikat ega spetsiif liste valkude aktiivsust. Selle asemel toimub rida fosfodiestersidemete ülekandeid, ilma et neid sidemeid kaotataks või uusi loodaks. Reaktsioonil on kofaktorina vajalikud vaba 3´-OH-ga guanosiinnukleosiidid või -nukleotiidid (GTP, GDP, GMP) ning monovalentne ja divalentne katioon. Absoluutselt vajalik on G(guanosiin)-3´-OH olemasolu. Splaissing on etapiviisiline (jn. 9.21). Kõigepealt toimub fosfodiestersideme ülekanne eksoni-introni ühendusalalt G(guanosiin)-3´-OH-le, mille tõttu selles punktis RNA-ahel ka katkeb. Seejärel katkeb fosfodiesterside järgmise eksoni ja introni 3´-otsa vahel ning vastavate eksonite vahel moodustub fosfodiesterside. Väljalõigatud intron muutub ringjaks molekuliks veel ühe fosfodiestersideme ülekandega. Järelikult ei esine siin mitte mingit trans-katalüütilist aktiivsust (ensüümide toimel), vaid cis-katalüütiline aktiivsus, mis on määratud RNA-molekuli struktuuri endaga. -OH 3´ 5´P5´P5´P- -OH 3´ -OH 3´ OH U-O-P G-OH U-O-P O-PUpA UpA U-O G-PEkson 1 Ekson 1 Ekson 1 Ekson 2 Ekson 2 Ekson 2 Väljalõigatud intron Splaissitud rRNA Intron Intron Introni fragment Rõngasjas intron rRNA eellane Ribosüümne aktiivsus Eksoni splaissing + Joonis 9.21. Autokatalüütilise splaissingu mehhanism Tetrahymena thermophila rR NA eellasmolekulis. Autokatalüütiliseks splaissinguks on vaja vaba guaniinnukleosiidi või -nukleotiidi 3´-OH otsa. Fosfodiestersidemete ülekandega lõigatakse intron välja ja vabanenud intron võib tsirkulariseeruda. 
2 Transkriptsioon ja RNA protsessing 289 fosfodiesterside (jn. 9.22). Protsessis osaleb kogu splaissosoom, kuid enne katke teket on vajalik, et splaissingusaidiga seostuks esmalt U1 snRNP. Introni 5´-katkesaidi äratundmiseks on vajalik aluspaaride paardumine konsensusjärjestuse ja snRNA 5´-terminuse lähedal oleva komplementaarse järjestusega. Teiseks snRNP-ks, mis ühineb splaissingukompleksiga, on U2 snRNP, seostudes A-jääki sisaldava konsensusjärjestusega, nn. harusaidiga. Edasises protsessis osaleb juba kogu splaissosoom. Järgnevalt ühinebki introni 5´-ots harusaidi A-ga, moodustades nn. lariantstruktuuri ning U1 ja U4 vabanevad. Edasi tekib katke introni 3´-splaissingusaidis, millega vabaneb eksoni 2 5´-ots. Protsessi lõpetamisel ühineb 3´-otsa ekson 2 eksoniga 1 (fosfodiestersideme moodustumine). Vabaneb lariantstruktuur koos snRNP-dega U2, U5 ja U6. Süsteemse erütomatoosluupuse (ingl. systemic lupus erythematosus, SLE) patsientidel on autoantikehad, millega saab snRNP-sid hõlpsasti välja sadestada. Nimetatud autoimmuunhaiguse puhul moodustuvad organismis antikehad, mis reageerivad organismis paljudele rakulistele komponentidele, k.a. snRNP valkudele. Neid antikehasid nimetatakse autoantikehadeks (ingl. autoantibodies). Autoantikehad põhjustavad patsientidel pikaajalist kudede närbumist ja organite kärbumist, millega võib kaasneda ka organismi hukkumine südame-, maksa- ja neerufunktsiooni häirete tõttu.